ELIot
酶联免疫斑点
问：什么是ELIot？
答：R&amD
Systems的ELIot测试采用了ELISA技术。先将对某一细胞因子专一的单克隆抗体固定于微孔板的PVDF膜上，再将经适当刺激诱导的细胞移液到微孔中，然后将整个微孔板放置在保湿的370CCO2培养箱中温育特定的时间；在温育的这段时间里，固定化的抗体与它们周围分泌细胞析出的细胞分子结合；洗掉细胞和未结合的分子，加入对这一细胞因子有特异性的生物素化的多克隆抗体；清除未结合生物素化的抗体，加入经streptavidin共轭的碱性磷酸酶；将未结合的酶从反应中洗除后，再加入底物溶液（BCIP/T）；一个蓝黑色的沉淀（斑点）在细胞因子产生的位置形成，每一斑点代表了分泌特定细胞因子的细胞。这些斑点可用自动读板系统（不同于普通读光仪）读出；或者，这些斑点也可用立体显微镜手控读出。
问：ELIot与ELISA有何不同？
答：ELISA实验测量的是样本中某一细胞因子的总量（一般表示为pg或ng /mL）；ELIot实验并不测定样本中某一细胞因子的量，而是测定有多少细胞在分泌某一细胞因子。
问：ELIot与组件有何不同？
答：R&amD
Systems的ELIot试剂盒含有：对某一细胞因子有特异性的单克隆抗体（这一抗体已预先固定在微孔板的PVDF膜上）、生物素化的检测抗体，Streptavidin共轭的碱性磷酸酶、BCIP/T产色物、和重组细胞因子阳性对照。试剂盒备有试验所需所有的用品，试验者不需再进行优化。
R&amD
Systems的ELIot开发试剂分为两个必需组分，必须分别购买对细胞因子具有特异性的开发组件和ELIot蓝色组件。对细胞因子专一的开发组件包括对细胞因子特异的捕获抗体和检测抗体；ELIot蓝色组件（目录#SE002）对所有R&amD
Systems的对细胞因子特异的开发组件都适用，它包含Streptavidin-碱性磷酸酶和BCIP/T产色物。
问：我是否可只使用ELIot试剂盒中的部分微孔板？
答：因为带有PVDF膜的微孔板很灵敏，我们不能将微孔板做成条状的形式。如温育多次，我们将不能保证使用微孔板所得的实验结果；因为微孔板不再无菌，所以未使用的微孔可能有污染。我们并不担心第一次使用时污染会有，因为大多数的细胞培养液都含抗菌素，而温育时间又相对较短。我们选择带有的PVDF微孔板是因为它能比标准ELISA级别的聚丙乙烯(polystyrene)微孔板提供更好的实验结果。
问：我需要用多少细胞？
答：这个问题比较难回答，根据实验要求而异。使用多少细胞有许多变量：比如细胞的大小、细胞的类型、分泌细胞因子的细胞的多少、诱导细胞的方法等。刚开始时，需要做一些细胞的稀释（如，将每孔10,000,000个细胞稀释到100,000甚至到10,000个细胞）来决定可形成明显斑点的最佳细胞数。例如，如果微孔中的细胞已达到单层融合状而大部分细胞分泌待测的细胞因子，形成的斑点就很难分开，这样就很难定量检测到分泌所测的细胞因子的细胞数；在这种情况下，应做一系列稀释(titration)，降低细胞数。如果在同样的单层融合状细胞中只有少数细胞分泌待测的细胞因子，形成的斑点就会很明显，就很容易被定量测定；在第这种情况下，细胞数目就是合适的。所以，必须针对不同细胞类型和诱导方法来确定每孔中应加入细胞的最佳数目。
问：在一个微孔板上可做多少个样本？
答：这是基于96孔微孔板的测试。除去阳性对照、阴性对照、本底（空白）和检测抗体对照外，还剩下88孔，可做44个样本（每个样本做双份）。
一般常见问题
问：蛋白和抗体的期限？
答：R&amD
Systems有一政策就是不给我们的蛋白和抗体产品提供生产日期或产品期限，从而限制产品的使用期限。在适当的储存条件下，蛋白和抗体趋于稳定多年。这些储存条件包括以干粉形式储存蛋白、或在蛋白浓度高于0.1毫克/毫升时冷冻（-20°C或-80°C）储存蛋白并减少冷冻/解冻的次数。请参照每一产品插页中的指示。我们公司常规的质量控制保证每一产品在售出时都具有生物活性。在实验者收到产品后，我们无法控制产品的储存状况。我们愿以产品保证书来替代产品期限。在正常实验条件下，我们保证R&amD
Systems的所有的产品将达到或超过我们公布的标准。
问：X产品是否可用于X用途但未列入资料单？
答：如果某一特定用途未列入我们的资料单，R&amD Systems内部没有更多的数据。我们的技术服务可以查阅我们的文献库，看一看是否有其他实验人员发表过这一产品的这类用途、样本类型、和/或种属。
问：列在你们网站上的产品带有/CF，是什么意思？
答：CF代表无携带物。一般来说，每1 mg的细胞因子都加有50
mg的A（携带蛋白）以稳定细胞因子。无携带物的形式不含任何A。通常来说，带有A的细胞因子比不带携带物的细胞因子可在更低的浓度保存、有更长的货架寿命。如果细胞因子是用于加入细胞/组织培养或作为ELISA的标准，可采用带有A的细胞分子。当细胞因子是用于原位应用、标记细胞因子、或A会产生干扰的实验时，应采用无携带物的细胞因子。
问：rhEPO是以单位列出的，如何换算成质量?
答：R&amD Systems的重组人EPO（超纯）目录#286-EP-250，和我们的重组人EPO（组织培养级）目录#287-TC-500，都有同样的单位对质量的转换。一单位的rhEPO大约是10 ng。
问：R&amD Systems是用什么级别的A来重新配制细胞因子溶液的？
答：R&amD Systems采用Serological Protei的馏分V A（目录#81-068）来重新配制蛋白溶液。Serological Protei的电话是(815)937-8270。
问：为什么一些R&amD Systems的重组蛋白有Fc融合？
答：Fc可以稳定分子。R&amD Systems利用Fc部分有趋于成双聚体的倾向，创建有生物活性的双聚体分子。以受体/
Fc嵌合体为例，与其可溶性受体相比，这种融合体辅助我们创建了可与它的配位体产生更高亲和力性的受体。R&amD
Systems提供同样的Fc部分作为对照。目录是：110-HG，人的重组IgG/Fc。
问：R&amD Systems的一些产品为什么需用酸性溶剂来重新配制？
答：采用酸性溶剂来重新配制某些细胞因子是非常关键的。因为有些细胞因子的等电子点很高，它们有极高的疏水性。如不使用这种酸性重配剂，
这些细胞因子就很难全部溶于溶液中。因为同样原因，我们还建议用同样的酸性重配剂来储存这些细胞因子的分装样。这些重配剂的pH值通常在4.5-5。
这些已处于溶液状态的蛋白分装样可用细胞培养液（或其它合适的缓冲液）进一步稀释到工作浓度。这样一来，溶剂中少量的酸可被缓冲掉，可安全用于活细胞。
问：为什么要将某一细胞因子用/A重新配制如果它是从同样的溶液中干粉化的？
答：在重配剂中额外的A可以帮助细胞因子的回收、同时也增加稳定性。R&amD
Systems用于干粉化溶液中的A的体积是极微的，所以用的/A重配剂并不会得到2X盐浓度。如果未按照资料单所述方式来重新配制，R&amD
Systems将不能保证产品的结果，因为我们就是这样来质量控制我们产品的。
问：如何将千道尔顿（kDa）转换成克/摩尔？
答：R&amD Systems将我们蛋白的分子量以千道尔顿（kDa）列在资料单上。大概换算率是：1道尔顿=1克/摩尔（即一个8千道尔顿的蛋白相当于8,000克/摩尔）。
问：如何将你们的产品换算成国际单位？
答：对细胞因子而言，业内尚无统一标准的单位。为避免混乱，R&amD
Systems有意识地将我们的蛋白以质量为单位。普遍接受的定义是：一单位等同于某一实验的ED50值。很显然，不同条件下的ED50值会有所不同。如果遵循某一实验结果的单位，或以单位来比较不同供应商的产品，必须首先确定产品来源的这一单位是如何定义的。当第一次用一批新产品或新来源时，R&amD
Systems强烈建议实验者先用样本做一系列稀释，建议以我们ED50范围的中点作为稀释的中点，上下各增加和减少5, 10,
20，甚至50倍。如果试验人员或产品的来源用他们的“单位”同WHO的标准单位相比，我们在目录中和网站上都列有“WHO转换表”(http://www.rndsystems.com/a/g_sitebuilder.a?bodyId=235），实验者可查询以便决定实验的设置。
问：为了有生物活性，这个蛋白要求我用一个交联结合的抗体-- MAB050。这是一个什么抗体？我一定要这么做吗？
答：这个抗体是针对6x组蛋白叠序的，我们建议使用的带有交联结合体的蛋白含有6x组蛋白标签。R&amD
Systems用这个抗体来交联结合组蛋白标签，使得带有组蛋白标签的蛋白具有更高的生物活性。R&amD
Systems质控检验这些经过抗体交联结合的蛋白，保证它们的ED50与未经交联结合的蛋白的ED50相符。所以，如不采用交联结合抗体，不同批号之间的蛋白将有非常显著的不同的ED50。
