饲料中维生素A的测定

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

LC1620A 高效液相色谱仪(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；

FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；

甲醇(色谱纯，美国Tedia)，维生素A 标准品(纯度＞95%，阿拉丁试剂)。

1.2 标准溶液的配制

参考GB/T 17817-2010 饲料中维生素A 的测定高效液相色谱法，配制浓度为3.44μg/ml 的标准工作液。

1.3 色谱条件

色谱柱：Shodex C18-100-4D(4.6×150mm)

流动相：甲醇：水(95：5)

流速：1.0ml/min

柱温：室温

进样量：20μl

检测波长：326nm

2 实验结果

2.1 精密度

将1.2 中所配制的3.44μg/ml 标准溶液，在1.3 描述的高效液相色谱条件下进样，重复进样五次，结果如表1 所示RSD 均在1.0%以内。

表1 精密度实验结果

图1 标准品谱图

2.2 标准曲线

将1.2 中所配制的标准待测溶液逐级稀释为1.29μg/ml、0.86μg/ml、0.43μg/ml、0.07μg/ml 不同浓度，在1.3 描述的高效液相色谱条件下由低浓度开始进样，所得标准曲线结果如下：

2.3 实际样品测定

参考GB/T 17817-2010 第一法皂化提取法对饲料样品进行处理，具体步骤如下：

1、皂化：称取试样5g，置于250ml圆底烧瓶中，加入50ml的L-抗坏血酸乙醇溶液(5g/L)，使试样完全分散、浸湿，加10ml氢氧化钾溶液(500g/L)，摇匀。置于沸水浴中回流30min，不时振荡。皂化结束后，分别用5ml无水乙醇、5ml水自冷凝管顶端冲洗，取出烧瓶冷却至40℃；

2、提取：定量转移全部皂化液于盛有100ml二氯甲烷的500ml分液漏斗中，用50ml水分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗，加盖、放气、随后混合，激烈振荡2min，静置、分层。同样操作三次，合并二氯甲烷相。用水100mL 洗涤二氯甲烷提取液至中性。后用无水硫酸钠脱水，转移至250ml棕色容量瓶中，加100mgBHT 溶解，用二氯甲烷定容至刻度。

3、浓缩：从二氯甲烷提取液中分取10ml，氮吹浓缩至近干。残渣以甲醇溶解，定容至1ml。用甲醇稀释100倍，经0.45μm滤膜过滤，作为待测样品溶液。

待测溶液在1.3 描述的高效液相色谱条件下进样，所得结果如下：

按称量样品量及稀释倍数计算得实际样品含量为2.08×10³mg/kg。

图2 实际样品谱图

3 结论

采用LC1620A 高效液相色谱仪，参考GB/T 17817-2010 的方法对维生素A 进行分析，分析精密度与线性关系结果良好，并对实际样品进行分析，分离检出良好，符合国家标准的分析需要。