HPLC使用过程中常见问题及解决方法

　　1.保留时间重现性不好

　　保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性，导致实验无法进行。引起这种现象因素很多，建议检查以下几个方面：

　　 -确认流动相是新鲜配置的，比例没有错误。

　　 -确认色谱柱是好的。

　　 -检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌，没有被堵塞。

　　 -如果您使用梯度洗脱方法，请确认平衡时间足够长。

　　 -仔细观察柱前压得变化，如果压力稳定，就可以判断泵的系统没有问题，请更换新的色谱柱试试。

　　 -如果是压力不稳定，一定会影响保留时间。解决方法请参见第2条

　　2.柱前压不稳定，压力上下波动

　　引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡，建议用以下的方法排除。

　　-如果您的系统没有配置脱气机（二元泵），溶剂一定要经常超声脱气。

　　-脱气机的效率不够，特别是用甲醇/水的系统最容易发生。可以将A，B通道串联；C，D通道串联用来延长脱气的时间，效果非常明显。

　　-主动阀阀芯污染。 可以将阀芯取下，用甲醇超声清洗。

　　3.排气阀里的过滤经常芯堵塞

　　如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高，请仔细检查一下换下来的过滤芯。正常情况下，一个过滤芯可以使用6个月左右，如果经常更换就有问题。

　　-如果过滤芯的颜色发黑，说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的，请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了，是否使用了柱塞清洗装置。 缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。

　　-如果过滤芯的颜色是乳白色的，非常干净。说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。 请检查一下您是否使用了过期的溶剂（水，有机溶剂），或质量不好的溶剂。请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水（推荐：娃哈哈纯净水）。如果流动相经过了滤膜过滤，请确认是否使用了正确的，优质的滤膜。建议您先不要使用滤膜过滤流动相，看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。

　　-如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗，该通路会生长藻类，藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体，藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。如果发生了这种情况，建议用60度的热水清洗溶剂瓶，并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。建议以后一定要用棕色瓶存放缓冲溶液，避光，并且定期清洗溶剂瓶。

　　4.峰面积或峰高重现性不好，偏差大

　　如果HPLC系统配有自动进样器，这种情况主要是自动进样器的问题。

　　-首先确认柱前压是稳定的，保留时间的重现性好（参见第1，2条）

　　-将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下 (默认值是200ul/min).您的样品有可能粘度较大，降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。

　　-如果进样针或针座有轻微的堵塞，对进样精度的影响也非常大。请参考第 5条的处理办法。

　　-如果是手动进样器，请确认一定要使用Agilent配的标准进样针，且进样器的废液出口要与进样口水平，避免虹吸的影响。如果是满Loop进样，建议注射5倍Loop的进样体积。

　　5.自动进样器的针头或针座经常堵塞，如何处理？

　　-如果针头或针座经常堵塞，请检查您所使用的进样瓶隔垫。质量不好和已经破损的隔垫易产生很多碎屑。进样时，这些细小的碎屑很容易将针头，针座堵塞。使用Agilent的正规隔垫并且经常更换旧的隔垫就可以避免这类问题。

　　-如果您的样品经过离心处理，用针头吸取上清液进样, 请将针头进样位置提高。

　　-如果针头或针座发生了堵塞，可以用以下简单的办法处理：通过Chemstation诊断界面的更换针头，针座的程序将其取下，反接到泵的出口，用反吹的办法将其疏通。 大部分是可以顺利解决的。

　　6.紫外检测器（DAD，VWD）信号波动大，噪音大，光强度检测通不过，如何处理？

　　引起这种问题的因素很多，要一步一步排除，直到找到问题真正原因。

　　-确定柱前压稳定；溶剂（高纯度的有机溶剂， 水）使用正确，流动相脱气良好（请参考第2条）；

　　-检查检测器的氘灯是否已经到了使用寿命，是否更换过新的氘灯。

　　-用异丙醇清洗整个系统，更换过滤芯，排除污染源。

　　-清洗流动池和有关的透镜（需要工程师去现场服务）

　　7.HPLC出“鬼峰”，如何排除？

　　HPLC 出“鬼峰” 大部分发生在反相体系（甲醇， 乙腈， 水），是溶剂被污染造成的。还有一种原因是进样系统有残留。

　　-让用户运行一个空白梯度洗脱的方法，从100%水过渡到100%有机溶剂，如果“鬼峰”出现，可以判断是水被污染了（水中有藻类Algae的污染）。如果用户是使用纯水机制作的水，这种现象是最常见的。建议用户更换“娃哈哈”纯净水。

　　-进样系统有残留很容易判断，建议用户加强或改善洗针程序，延长冲洗Loop的时间。