中国科研工作者对抗体试剂问题的反思

　　2015年5月19日 Nature杂志从美国和加拿大几位资深科学家的亲身经历，深度阐述了目前抗体试剂的现状与问题，给全世界科研工作者敲响了警钟。身为中国科研工作者，我们遇到的抗体试剂问题只怕比国外同行来得更多，当下除了抱怨，我们更应深刻反思：如何才能获得高质量、合适的抗体试剂。

　　获得高质量、合适的抗体试剂也并非难事，我们需要在以下三个方面加以甄别：1.优秀的抗体供应商；2.过硬的冷链物流体系；3.正规的销售（直销/分销）渠道。

　　1. 优秀的抗体供应商

　　优秀的抗体供应商应具备以下条件或者能为客户提供以下信息：抗原序列选择、抗体纯化方式、抗体验证数据、应用指南。

　　i. 抗原序列选择

　　抗原序列选择至关重要，直接决定了抗体的特异性/低交叉反应和抗体产量，因此抗原序列选择不仅要保证全基因组内同源序列最低，同时还要排除信号肽和蛋白跨膜区序列。

　　ii. 抗体纯化

　　抗体纯化目前主流的三种方式分别是：盐析法粗纯、Protein A/G通用型纯化和特异抗原纯化柱，三种方式的纯化效果和抗体效价依次提高。其中Protein A/G通用型纯化的效果和成本适中，目前大部分抗体试剂公司都采用该方式进行大规模抗体生产。要想获得较高质量的抗体，需要通过特异抗原纯化柱，但由于涉及固定特异抗原等操作，成本相应是最高的，然而，使用该方法纯化出来的抗体纯度和特异性最高。

　　iii. 抗体验证数据

　　目前很多供应商都有抗体验证数据，但我们并不知道这些验证数据的具体来源。很多抗体都有WB验证数据，但很少有供应商标明WB是在哪些细胞系内验证，如果是过表达的细胞系，那WB验证意义就不大了。同样，免疫组化或免疫荧光也存在类似问题，验证的数据具体来源于哪种组织、哪种病理样本鲜有提及。而来源不同，实验结果会千差万别。供应商往往用一种最容易得到实验室数据的样本做实验，但这样的抗体用到我们自己的实验时，往往会有多种问题出现。

　　iv. 应用指南

　　抗体供应商一般会根据验证数据推荐相关的应用，所以验证数据对于应用有决定性作用。应该特别注意，同一支抗体可以做WB，却并不一定适合于免疫荧光或免疫组化，反之亦然。因此，供应商的抗体验证数据就显得非常重要了。

　　以上列出了优秀抗体供应商的4条硬性要求，现实中有哪些能很好地做到以上几点呢？下面以Sigma-Aldrich提供的HPA金标抗体为例。HPA金标抗体由Human Protein Atlas (HPA)Project设计并验证。

　　1）HPA金标抗体抗原选择

　　HPA金标抗体的免疫抗原是重组人蛋白表位识别标签(PrESTs)，表位识别标签一般含有50-150个氨基酸。表位识别标签经过设计和筛选，使得它们含有独特的表位，并且适合激发高特异性的抗体产生。通过对人全基因组扫描的方式，确保用于生产抗体的蛋白表位识别标签与其它蛋白有最低的同源性。同时，抗原表位还会排除信号肽和蛋白跨膜区。

　　2）HPA金标抗体亲和层析纯化

　　HPA金标抗体通过亲和层析方式进行纯化(以PrESTs抗原作为配基，特异抗原纯化柱)，采用三步法免疫层析的纯化工艺：HisABP特异性标签去除，PrESTs特异性捕获，最后通过排阻色谱进行缓冲液的交换，不仅保证了抗体的纯度，同时有利于抗体长期保存。

　　3）HPA金标抗体验证

　　每一支HPA金标抗体都经过蛋白芯片、免疫组化、WB和免疫荧光的实验验证，验证的数据量不仅巨大--每支抗体超过700张实验验证图片（病理学家认证并注释）在线查询，而且，验证数据是来自于不同组织和细胞系样本，还会结合参考文献以及生物信息学预测，确保每一个实验数据的可靠性。

　　4）HPA金标抗体应用指南

　　HPA金标抗体主要以免疫组化/免疫荧光为主，大部分抗体同时支持WB实验。基于多种组织或者细胞的验证结果，给广大科研工作者提供了宝贵的数据参考。

　　综上，HPA金标抗体可称得上是优质抗体典范，而Sigma-Aldrich算是优秀的抗体供应商之一。

　　2. 过硬的冷链物流体系

　　目前冷链物流体系已经非常成熟，各家供应商一般都能保证抗体的低温运输。对于供应商而言，主要是舍得投入，这一点做得比较突出的有Sigma-Aldrich，抗体收到后，一般冰盒还能坚持2-3天，足以让使用者安心实验。

　　3. 正规的销售（直销/分销）渠道

　　在国内，销售渠道是问题突出的关键环节，尤以假抗体试剂为甚，很多产品在包装上其实是可以辨别的（科研工作者很少关注，往往以价格为导向）。在利益的驱使下，部分经销商经常会自己制作抗体试剂，贴上假冒标签以次充好；另一个很普遍的现象是从正规渠道购得抗体试剂，通过小作坊稀释分装后，再出售给科研工作者。无论是以次充好，还是稀释分装，都会给科研工作者都带来很多实验风险，最后买单的始终是广大中国科研工作者，不仅耗费金钱和人力，更难以弥补的是宝贵的时间成本。

　　因此在购买渠道上，建议大家尽量从官方指定经销商处购买抗体试剂，抑制假货的流通。同时，随着电子商务平台的成熟，大家可以直接在各大官方网站订购试剂，这是最安全便捷的购买渠道。关于这点，免不了再次提及Sigma-Aldrich，Sigma-Aldrich是国内最早实行电子商务的生命科学产品供应商，并且以直销为主导，避免了中间流通环节的问题，加上其强大的物流体系，很大程度上降低了销售环节可能带来的实验风险。

　　面对纷繁复杂的抗体市场，建议大家购买抗体试剂时谨慎选择，切勿贪图小利，通过正规销售渠道购买优秀供应商的抗体，最大限度降低因抗体质量问题给我们带来的损失。