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制备和纯化mRNA显示蛋白实验

实验方法原理 实验材料 DNA 库不含甲硫氨酸的翻译混合物试剂、试剂盒 MgCl2核苷三磷酸溶液转录缓冲液去离子超滤水T7 RNA 聚合酶固体 EDTA尿素缓冲液NaCl乙醇EDTAATPT4 多核苷酸激酶缓冲液T4 多核苷酸激酶T4 DNA 连接酶缓冲液T4 DNA 连接酶乙酸钾溶液兔网织红细胞裂解物翻译试剂盒氯化钾乙酸镁不含核酸酶的水兔网织红细胞裂解物35S甲硫氨酸对照 RNA仪器、耗材 电洗脱仪变性 PAGE 胶 胶凝胶过滤柱（Pharmacia）实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 如下在冰上配制 1 ml 转录反应混合物，最后加入 T7 RNA 聚合酶：DNA库（终浓度为 5～50 nmol/L）35 ul 1 mol/L MgCl250 ul 各成分为 100 mmol/L 核苷三磷酸混合物（各 NTP 终浓度为 5 mmol/L）100 ul 10× 转录缓冲液（最终为 1×）加......阅读全文