蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验6
方案6 羧基端序列分析实验实验材料利用一维或二维聚丙烯酰胺凝胶分离的蛋白质或溶液中的蛋白质试剂、试剂盒乙酸酐 二甲基吡啶烷基化乙内硫酰脲 (ATH) 氨基酸标准品溴甲基萘的乙腈溶液考马斯亮蓝（R250）二异丙基乙胺（DIEA)的庚烷溶液乙酸乙酯甲醇N-甲基咪唑的乙腈溶液异氰酸苯酯的乙腈溶液哌嗪硫氰酸酯的乙腈溶液四丁基铵硫氰酸酯的乙腈溶液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材氨基端测序仪氩气烧杯羧基端测序仪加热块微型离心管培养皿PVDF 膜反应容器反相C18柱实验步骤一、将蛋白质转移到 PVDF 膜上步骤1 利用电印迹法或从溶液中直接吸收（利用 ProSorb 样品制备容器），向 PVDF 膜转移 50?IOOpmol 的蛋白质样品。具体如下。对于蛋白质电印迹到 PVDF 膜：1.将凝胶中分离的蛋白质电转移到一张 PVDF 膜上（见方案 2 和 Mozdzanowski,et al,1992)。2.用考马斯亮蓝 R250(见方案 3) 浸染......阅读全文
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验6
方案6 羧基端序列分析实验实验材料利用一维或二维聚丙烯酰胺凝胶分离的蛋白质或溶液中的蛋白质试剂、试剂盒乙酸酐 二甲基吡啶烷基化乙内硫酰脲 (ATH) 氨基酸标准品溴甲基萘的乙腈溶液考马斯亮蓝（R250）二异丙基乙胺（DIEA)的庚烷溶液乙酸乙酯甲醇N-甲基咪唑的乙腈溶液异氰酸苯酯的乙腈溶液哌嗪硫氰酸
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验
方案1 两相柱测序仪的样品上样实验实验材料样品溶液试剂、试剂盒甲醇（HPLC级）三氟乙酸（TFA）仪器、耗材双向测序柱（Agilent）氮气供应设备聚丙烯试管样品加样器上样漏斗实验步骤一、浸润层析柱1.将准备好的两相柱的亲水段（凸向接头）移开，放在一边。2.将柱的疏水段（凹向接头）和上样漏斗装配在一
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验
方案1 两相柱测序仪的样品上样实验 方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验 方案3 检测 PVDF 膜上的蛋白质实验 方案4 浓缩聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质点实验 方案5 磷酸化多肽的固相微量测序实验 方案6 羧基端序列分
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验4
方案4 浓缩聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白质点实验实验材料包含目的蛋白的二维电泳凝胶点试剂、试剂盒丙烯酰胺混合物（30%）琼脂糖 50g L考马斯亮蓝染色液脱色液平衡缓冲液10 X 聚丙烯酰胺电泳缓冲液浓缩胶仪器、耗材巴氏滴管聚丙烯管Protean II xi 2-D 电泳槽（Bio-Rad)注射器试管管式
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验3
方案3 检测 PVDF 膜上的蛋白质实验实验材料含目的蛋白的 PVDF 膜试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色液脱色液仪器、耗材塑料容器实验步骤1.依方案2 电转移后，将 PVDF膜迅速放于塑料容器中，并加人考马斯亮蓝染色液浸没膜。室温下染 5〜10 min 。2.弃去染色液，加人脱色液浸没膜，在 PVDF
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验2
方案2 将蛋白质从凝胶电转移至 PVDF 膜实验实验材料含目的蛋白样品的聚丙烯酰胺凝胶（ 未染色）试剂、试剂盒CAPS甲醇转移缓冲液仪器、耗材电印迹设备塑料容器聚偏二氟乙烯（PVDF)膜实验步骤要点：为了避免凝胶或膜的蛋白质污染，进行以下操作时需戴手套。1.凝胶电泳之后，立即将凝胶转移到一个塑料容器
蛋白质氨基端及羧基端序列分析实验5
方案5 磷酸化多肽的固相微量测序实验实验材料放射性标记的多肽试剂、试剂盒碳二亚胺试剂偶联缓冲液甲醇-水多肽溶剂S3 (氯丁烷 正丁醇）闪烁液仪器、耗材ATZ-收集器加热块小滴管Mylar 聚酯薄膜蛋白质测序仪闪烁计数器Sequelon-AA 试剂盒测试管实验步骤1.将放射性标记的肽段在小试管中溶解于
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验材料 蛋白质样品（约 200 mol） 试剂、试剂盒 1％乙酸溶液（含丽春红 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40)消化缓冲液1 mg／ml 胰蛋白酶层析溶液 A层析溶液 B 仪器、耗材 0.22 μm
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 蛋白质样品（约 200 mol）
N－端封闭蛋白质内部序列测定实验
实验方法原理 实验材料 蛋白质样品（约 200 mol）试剂、试剂盒 1％乙酸溶液（含丽春红 S 染料）1％ 乙酸0.2 mol／L NaOH0.1 mol／L 乙酸溶液(含PVP-40) 消化缓冲液 1 mg／ml 胰蛋白酶层析溶液 A 层析溶液 B仪器、耗材 0.22 μm 硝酸纤维素膜酸洗过的
氨基酸序列测定实验
基本方案 测定通过 SDS-PAGE 转移到 PVDF 膜上样品的氨基酸序列 辅助方案 准备SDS-PAGE蛋白质样品 实验方法原理
氨基酸序列测定实验
实验方法原理 实验材料 分离胶和积层胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒 4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%（V／V）考马斯亮蓝的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液仪器、耗材 微量注射器或凝胶加样吸头PVDF 膜小型电转装置自动蛋白质
蛋白质序列分析和结构预测实验
实验步骤 1. 人脂联素蛋白质序列的检索（1）调用Internet浏览器并在其地址栏输入Entrez网址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的选择栏中选择protein；（3）在输入栏输入homo sapiens adiponectin；
蛋白质序列分析和结构预测实验
实验步骤1. 人脂联素蛋白质序列的检索（1）调用Internet浏览器并在其地址栏输入Entrez网址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的选择栏中选择protein；（3）在输入栏输入homo sapiens adiponectin；（
蛋白质序列分析和结构预测实验
蛋白质序列分析和结构预测实验 实验步骤 1. 人脂联素蛋白质序列的检索（1）调用Internet浏览器并在其
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验材料PK-120试剂、试剂盒Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪Applied Biosy
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
实验方法原理 实验材料 PK-120试剂、试剂盒 Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材 Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪A
PK120－的纯化及肽段氨基酸序列分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 PK-120
氨基酸序列测定实验——辅助方案
实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒1 mol／L NaHCO3 （可选）100％ 冰冷乙醇(不含变性剂 USP 级)样品缓冲液 0.1％ （V／V）焦宁 Y 染料仪器、耗材超滤浓缩器／Speedvac蒸发器拉细的巴斯德吸管／凝胶加样吸头1.5 ml 微量离心管离心机实验步骤1. 必要时，用1 mol/L
分子进化的起源
在漫长的进化过程中生物的 DNA经历了各种各样的变化。包括基因突变、基因重组、染色体易位等。碱基置换突变常导致蛋白质中一个氨基酸的改变。例如正常血红蛋白第 6位的谷氨酸改变为缬氨酸便成为镰形细胞贫血症的血红蛋白 HbS，为赖氨酸替代则成为HbC，前者的碱基是从GAA（谷氨酸）→GUA（缬氨酸），后者
核酸序列分析实验
实验方法原理针对核酸序列的分析就是在核酸序列中寻找基因，找出基因的位置和功能位点的位置，以及标记已知的序列模式等过程。在此过程中，确认一段 DNA 序列是一个基因需要有多个证据的支持。一般而言，在重复片段频繁出现的区域里，基因编码区和调控区不太可能出现；如果某段 DNA 片段的假想产物与某个已知的蛋
多肽合成与修饰技术
实验技术：多肽 合成是一个固相合成顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来，经过不断的改进 和完善，到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，表现出了经典液相合成
氨基酸序列测定实验——基本方案
测定通过 SDS-PAGE 转移到 PVDF 膜上样品的氨基酸序列实验材料分离胶和积层胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%（V／V）考马斯亮蓝的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液仪器、耗材微量注射器或
蛋白质序列分析及结构预测策略包括哪些步骤
序列分析通常就是指同源性分析、保守位点分析，motif分析和功能预测等，结构预测通常又包括二级结构三级结构甚至四级结构，二级结构目前预测还是比较准确的，三级结构最简单的可以直接将蛋白序列提交swissmodel在线进行预测，也可以采用一些其他软件，如modeller和一些商业软件，主要原理是同源
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】1、掌握蛋白质序列检索的操作方法；2、熟悉蛋白质基本性质分析；3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、 结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测；4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素 (adiponectin)
核酸和蛋白质序列分析2
（2）输出：除了以文本形式外，还可以通过JalView显示和编辑结果。此外，还可以另外使用GeneDoc（常见于文献）及DNAStar软件等显示结果。多序列比对的结果还用于进一步绘制进化树。3、ORF(Open Reading Frame)分析从核酸序列翻译得到蛋白质序列，需要进行ORF分析，每个生
蛋白质序列分析和结构预测
【实验目的】 1、掌握蛋白质序列检索的操作方法； 2、熟悉蛋白质基本性质分析； 3、熟悉基于序列同源性分析的蛋白质功能预测，了解基于motif、结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测； 4、了解蛋白质结构预测。【实验内容】 1、使用Entrez或SRS信息查询系统检索人脂联素（ad
核酸和蛋白质序列分析1
在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信息，从而指导进一步的实验研究。通过染色体定位分析、内含子／外显子分析、ORF分析、表达谱分析等，能够阐明基因的基本信息。通过启动子预测、CpG岛分析和转录因子分析等，识别调控区的顺式作用元件，可以为基因的调控研究提供基础。通过蛋白质基本
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
方案1 蛋白质的过甲酸氧化实验 方案2 蛋白质还原和S-羧甲基化：大规模方法 方案3 蛋白质还原和S-羧甲基化：微量方法 方案4 用Ellman 试剂测定自由巯基和二硫键实验 方案5 蛋白质的胰酶消化实验 方案6 用溴化氰切割 M
电泳分离的蛋白质肽谱和序列分析实验
实验材料 冻干的纯化蛋白样品试剂、试剂盒 甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH 固体仪器、耗材 旋转蒸发器小试管实验步骤 1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中，在室温下放置让，将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。3.在预冷的小试管中，将蛋白质溶解于 50ul 过