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实验方法原理 在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丢失频率大约1%。 在本方案中含质粒的酵母菌株接种于非选择性平板上以分离质粒并可得到单菌落。然后通过影印到选择性平板上可以鉴别丢失了质粒的菌株实验材料 含质粒的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD或其他非选择性液体培养基及平板CM缺失成分平板仪器、耗材 灭菌绒布及影印模板实验步骤 1) 挑取几个含质粒的酵母菌单克隆，分别接种于10 mL非选择性培养基，30℃培养过夜。如果没有其他的选择，可以用YPD培养基，如果要保留其他不稳定遗传标志或质粒，可以用添加了与可能丢失的可选择标志相应的营养成分的确定成分培养基。2) 涂布在相应的非选择性平板上以得到单菌落，30℃培养2天。3) 影印到选择性平板上以确定丢失了质粒选择标志的菌落。将选择性平板和非选择性主平板置30℃培养过夜。......阅读全文
第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分
实验材料 载体和酵母菌 试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 SD
一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内，得到包含 RNA 质粒的细胞，再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库（杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性，与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白
实验方法原理 酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。试剂、试剂盒 YPD 和 SD 培养基鲑
酵母三杂交系统（yeast three-hybrid system）可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中，RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录，可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方
方法转化文库1. 挑选一个在第一阶段的原始对照试验中状态最好的表达诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道子的酵母菌落，接种于 20 ml CM(Glu)-Ura-His 液体培养基中，30°C 摇动过夜培养。重要：应该在用文库重新转化之前 7~10d 内，将诱饵蛋白和 lexAop-lacZ 报道
原核表达系统是常被用来研究基因功能的成熟系统，由于原核表达系统具有包涵体蛋白不易纯化、蛋白修饰不完整等缺陷，人们也开始利用真核细胞表达系统来研究基因。自上世纪70年代基因工程 技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。并随着人类基因组计划实施的进行，在技术方法上得到了很大发展，时至今
中 国ACCC 中国农业微生物菌种保藏管理中心ISF 中国农业科学院土壤肥料研究所SH 上海市农业科学院食用菌研究所CACC 抗菌素菌种保藏管理中心IA 中国医学科学院抗菌素研究所 SIA 四川抗菌素工业研究所CGMCC 普通微生物菌种保藏管理中心AS 中国科学院微生物研究所AS-IV 中
酵母双杂交技术，它是通过利用转录激活因子GAL4的特性而建立的。GAL4由两个结构域组成，一个为N端的DNA结合域（DNAbinding domain，DBD），另一个是C端的转录激活域（active domain，AD），二者可以从核酸一级结构上分开而独立表达出有功能的结构域；当二者在物理空
酵母双杂交技术，它是通过利用转录激活因子GAL4的特性而建立的。GAL4由两个结构域组成，一个为N端的DNA结合域（DNAbinding domain，DBD），另一个是C端的转录激活域（active domain，AD），二者可以从核酸一级结构上分开而独立表达出有功能的结构域；当二者在物理空
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或者表达的重要媒介，这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值，质粒提取是分子生物学最常见的实验之一。目前质粒提取实验大多借助试剂盒来完成，那么关于质粒提取的原理，您的了解足够深入吗？ 目前，质粒提取试剂盒最常用的方法是碱裂解法。碱裂解法原理：根据共价闭合环状D
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相层析, 经典的蛋白质鉴定方法如氨
离心机和转子Sorvall RT6000 离心机，H1000B MPC 和 H6000A MPC 转子（离心微量滴定板用）专用设备玻璃珠（直径 0.45 mm, 无菌；Sigma)微量滴定板（24 孔或 96 孔 [可选])重复用移液管可选，请参见步骤 1。附加试剂此方案的步骤 2 需要第 1 章方
作为后基因组时代出现的新兴研究领域之一, 蛋白质组学(proteomics)正受到越来越多的关注。 蛋白质组学的研究目标是对机体或细胞的所有蛋白质进行鉴定和结构功能分析。 蛋白质组学的研究不局限任何特定的方法。 高分辨率的蛋白质分离技术如二维凝胶电泳和高效液相
酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒 容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。酵母细胞质粒提取 步骤1. 接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸 营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。2.第二天取一滴菌液于进行显微镜
酵母双杂交系统的实验步骤 1. 将报告基因p8op-LacZ转化酵母EGY48菌株，用培养基SD/-Ura筛选。2. 同时构建DNA文库，并纯化足够的质粒以转化酵母细胞。3. 构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X，作为钓饵（bait）。4. 将
实验概要本实验将酿酒酵母作为胞内晶体蛋白的携带和表达宿主，同时，作为可能的营养体喂养海洋线虫P. redivivus将所表达的目的蛋白导入线虫机体，观察线虫的生长、发育、繁殖或是死亡情况，探讨胞内晶体蛋白对昆虫病原线虫以外的线虫是否具有营养作用。为此，首先构建一种重组大肠杆菌，其所携带的重组质粒能够
第二阶段 筛选一个相互作用子材料缓冲液和溶液将贮存液稀释至适当的浓度二甲基亚砜（DMSO)乙醇可选择，请参见步骤 9。冻存转化体用的无菌甘油溶液65% 无菌甘油0.1mol/LMgS0425 mmol/L Tris-Cl(pH8.0)TE(pH7.5)（无菌）TE(pH7.5)，含 0.
酵母感受态细胞制备可以：（1）用于建立酵母转化体系；（2）用于酵母表达系统构建；（3）用于酵母其他分子生物学研究。实验方法实验材料酿酒酵母 试剂、试剂盒YPDA液体培养基 蒸馏水 甘油 二甲基亚砜 仪器、耗材培养皿 离心机 离心管 冰箱 实验步骤一、试剂与耗材 1. 试剂 细菌
酵母感受态细胞制备可应用于：（1）建立酵母转化体系；（2）酵母表达系统构建；（3）酵母其他分子生物学研究。实验方法原理感受态是受体最容易接受外源DNA片段并实现转化的一种生理状态，用对应化学物质处理细胞后，细胞逐渐形成感受态细胞并进行转化。化学法简单，快速，稳定，重复性好，广泛用于外源基因的转化。实
化学法 试剂盒制备法 实验方法原理 感受态是受体最容易接受外源DNA片段并实现转化的一种
4 建立病原作基因的表达模型 由于病原体的基因组规模相对较小，可用包含其全部基因的DNA 芯片鉴定那些对人产生毒害作用的基因。异烟肼（isoniazid，INH）是治疗肺结核的常用药物，其治疗结核病的机制是它阻断了分枝茵酸的生物合成途径。Wilson等根据已测序的肺结核杆菌基因组序列，用PCR
概述酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子， 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域（DNA-binding domain）和转录激活结构域（transcription-activating domai
独体—基于纤连蛋白类型Ⅲ结构域框架的抗体模拟 Akiko Koide and Shohei Koide
摘要 蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新兴的研究领域, 它的主要任务是识别鉴定细胞、组织或机体的全部蛋白质, 并分析蛋白质的功能及其模式。 因此, 揭示蛋白质组中蛋白质间的相互作用关系也是蛋白质组学的重要内容之一。 酵母双杂交技术是用来检测蛋白质间是否相互作用的一
实验材料pAS38pAS45pAS47试剂、试剂盒聚乙二醇（PEG) 氯化钠溶液HEPES 缓冲液涂布溶液Tris 缓冲盐水TBS-Tween-20琼脂糖-磷酸溶液仪器、耗材LBSOCYT实验步骤3.1 实物库构建我们用 Kunkel 突变技术构建大多数的实物库虽然我们证明了 AB 链套
蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表
3.2.2 单噬菌体克隆的鉴定( 1 ) 从单克隆中制备噬菌体（或噬粒)。对噬粒，在 2 ml LB-Ap 上过夜生长一单菌落。混合 20 μl 培养液、2 ml LB-Ap ( 和 IPTG，如愿意的话）和 1010 个/ml 辅助噬菌体 KO7。37°C 剧烈摇动保育过夜。对
实验方法原理 根据该方案制备的酵母 DNA 可以用作 PCR 反应的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能复制的穿梭质粒也可以从酵母中
确定各种可能与目标蛋白相互作用的蛋白质，“撒大网”l 双杂交和其他双成分系统第一阶段：诱饵-LexA融合蛋白的鉴定诱饵-LexA融合蛋白的构建1．将编码诱饵蛋白的靶DNA克隆到LexA融合载体的多聚接头处，