WIKI资讯
WIKI资讯
靶的选择和试验设计1.针对目的基因序列选择合适的扩增片断查看以下三个网站是否有合适的已经证实的QRT-PCR的扩增引物,探针以及反应条件.RTPrimerDB (http://medgen.ugent.be/rtprimerdb), 相对物种较多PrimerBank (http://pga.mgh.harvard.edu/primerbank/index.html) 人，鼠Real Time PCR Primer Sets (http://www.realtimeprimers.org) 人，mouse，rat如果没有合适的或者已经证实的可以提供参考,以下的设计方案仅供参考:A.最广泛使用的商业化的软件Beacon Designer(http://www.premierbiosoft.com)B.DIY的软件Primer ExpressC.如果Beacon Designer 无法得到您说需要的结果,或者获得到设计方案的备选数目不......阅读全文
实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光集团，利用荧光信号来实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析。 病原学检测是动物疾病确诊的关键点，而聚合酶链式反应（PCR）是目前病原检测的最常用的分子生物学技术，具有高敏感性的特征。PCR技术发展已日趋完
荧光定量PCR实验指南一、基本步骤：1、目的基因（DNA和mRNA）的查找和比对；2、引物、探针的设计；3、引物探针的合成；4、反应体系的配制；5、反应条件的设定；6、反应体系和条件的优化；7、荧光曲线和数据分析；8、标准品的制备；二、技术关键：1、 目的基因（DNA和mRNA）的查找和比
实验室很多同学都要做Real time PCR实验，实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见，不过也有实验室前没有做过的，查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物，探针法的出现使得定量
定量PCR 定义 以参照物为标准对PCR终产物进行分析或对PCR过程的进行监测，来评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR相对定量→绝对定量， 手工操作→自动化检测， 灵敏度与特异性多有很大的提高。 定量PCR的可行性 定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 特定的待扩增基因片段 起始含量越大，则指
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备
聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是在许多情况下，我们所感兴趣的是未经 PCR
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单
利用实时定量PCR和2－△△CT法分析基因相对表达量 METHODS 25, 402–408 (2001)Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR and the 2－△△CT M
嗜酸乳杆菌是重要的益生菌，被大量应用在食品中。研究表明嗜酸乳杆菌能在乳制品中产生乳酸，并能通过氨基酸代谢增加风味。嗜酸乳杆菌主要作用有降低pH值、产生抗菌素（如嗜酸菌素和乳酸杀菌素等），在一定程度上抑制肠道中有害微生物的有害作用。有研究发现嗜酸乳杆菌对大肠杆菌、腹泻致病菌等均有抑制作用；大量的嗜酸乳
功能强大的五色平台已经过校准，可提供种类的染料：FAM™/SYBR® Green I、VIC®/JOE™、NED™/ TAMRA™/Cy®3、ROX™/Texas Red® 和 Cy®5 染料 独特设计的快速加热块可在速运行的时候保证热均一性 在不影响延伸时间或分析质量的情况下，快速
刘向国 谢国明 (重庆医科大 重庆市 400016)摘 要 荧光定量PCR仪技术是一种新的核酸定量技术，该技木在PCR仪反应系统中引人了荧光标记探针，具有可实时监测，高灵敏性，高特异性和高精确性的特点，极大地克服了原有PCR仪技术的不足，扩大了PCR仪的应用范围。关键词 定量pcr；荧光；基因Flu
实践中的问题实时定量PCR已广泛地运用于分子生物学的各个领域，就目前的应用情况来看，虽然取得了很好的效果，但是其在方法学上的选择、敏感性问题、重复性问题等都一直是争论不休的，本文将就这些问题做出探讨。1. 方法的选择：研究者在实验中往往想要得到目的基因的绝对量，因为绝对定量对目的基因的表达差异有直接
PCR实验室产品选择指南 荧光 基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波，可以作为抗体等分子的标记物，实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。 荧光基团 吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光
实时定量PCR (qPCR)的优势•实时检测PCR反应过程•精确计算出每个循环的PCR产物量•扩增和检测同时进行•消除后续PCR的干扰在实时定量PCR反应中，杂交探针与插入染料如SYBR Green相比是更好的选择。荧光标记探针可以提高实时定量PCR结果的效率、灵敏度和特异性。而且定量PC
【摘要】目的 建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光 PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法 根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针，并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本，应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。 结果 荧
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli D
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。 1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-
【摘要】 目的 对本室利用Taq Man MG技术建立的HSV-2实时定量PCR法进行方法学评价及临床应用。 方法 收集60名近期有流产史妇女的全血及血清标本，分别用FQPCR和ELISA法同时检测，并进行比较；另对FQPCR从重复性、灵敏度、线性范围、特异性几方面进行方法学评价。结
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合
一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录)不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法，因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高，所以，正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法，在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总rna的提取过程中，注意避免mRNA的断裂;取2u
荧光定量PCR简介 荧光定量PCR检测技术诞生至今已10多年的时间，而其应用一直都没广泛展开，究其原因，无外乎受制于相关仪器、试剂和技术的发展。近期，尤其是08年以来，仪器和试剂是遍地开花，这也使科研人员均跃跃欲试，都想借此技术使自己的研究能突飞猛进，发展势头通过查找每年所发表的文章数可一目了然。据
实时荧光定量 PCR技术原理与应用聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后，我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析，也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析，分析的都是 PCR 终产物。但是
模板 DNA 量越多，荧光达到域值的循环数越少，即 Ct 值越小。Log 起始模板浓度与 Ct 呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，根据样品 Ct 值，就可以计算出样品中所含的模板量。目前常用荧光标记方法 方法 优点
除了为克隆基因、预测编码蛋白而需要研究基因的构成外，当前在基因组学上的努力也包括对基因组构成的研究，以分析具有结构和调控因子插入的基因。近源物种分析成为比较基因组学的主要内容，被认为是研究进化、基因功能和人类疾病的重要方法。 利用该方法分析微生物，特别是细菌的基因组，早在 1996 年就已开始
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具[1]。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存
一、什么是miRNA?MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（双链）但是和siRNA密切相关。据推测，这些非编码小分子RNA（miRNAs）参与调控基
荧光定量PCR的应用分子生物学研究1、核酸定量分析。 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。2 、基因表达差异分析。 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 （ 如药物处理、物理
(张蓓，沈立松 上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心)摘要:多聚酶链反应飞速的发展使其成为了分子生物学实验室重要的工具，实时荧光定量PCR(real-timequantitative PCR)技术以其敏感性高、重复性好、速度快和污染少使PCR技术又
定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。选择定量PCR仪的关键——由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。至于荧