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Science杂志最受关注的文章(9月)

美国的《Science》杂志由爱迪生投资创办,是国际上著名的自然科学综合类学术期刊,与英国的《Nature》杂志被誉为世界上两大自然科学顶级杂志。Science杂志主要发表原始性科学成果、新闻和评论,许多世界上重要的科学报道都是首先出现在Science杂志上的,比如艾滋病与人类免疫缺陷病毒之间的关系,标志性基因组研究成果等。Science杂志近期下载量最多的文章包括: Cyclic GMP-AMP Synthase Is an Innate Immune Sensor of HIV and Other Retroviruses Daxing Gao, Jiaxi Wu, You-Tong Wu, Fenghe Du, Chukwuemika Aroh, Nan Yan, Lijun Sun, Zhijian J. Chen Aug 23, 2013; 341:903-906 研究人员发现了一种......阅读全文

DNA序列测定的技术和策略

目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸,每组寡核苷酸都有固定的起点,但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇:水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤材料缓冲液和溶液稀释缓存液至适当浓

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

            试剂、试剂盒 无菌的过滤水 乙腈 乙酸铵 正丁醇 不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇:水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材 MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤 材料缓冲液和溶液稀释缓存液至

GeneLink 未修饰的DNA寡核苷酸的价格表

  Gene Link寡核苷酸适用于要求苛刻的应用和一致的结果。我们认为,重视时间并且没有因寡核苷酸质量而导致实验失败的空间的研究人员应考虑使用Gene Link。我们针对每种寡核苷酸的众多质量控制步骤可确保您放心。   Gene Link Oligo合成部门不是“寡头工厂”。在合成过程中以及在通

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

寡核苷酸5'末端磷酸化实验

以下介绍的是标记 10pmol 高比活度的寡核苷酸的反应,标记不同量的寡核苷酸可以通过增加或减少反应体积而保持各组分的相应浓度来实现。也可用类似的反应条件,将非放射性的磷酸加到用于定点突变的合成寡核苷酸 5'末端。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。试剂、试剂盒T4噬菌

DNA序列测定技术

DNA序列测定技术序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam-Gilbert DNA化学降解法测序策略  目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方法都是同样生成互相独立的

寡核苷酸5'末端磷酸化实验

试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-ClT4噬菌体多核苷酸激酶寡核苷酸[γ-32P]ATP仪器、耗材 微量离心管水浴箱实验步骤 材料缓冲液与溶液稀释贮存液至适当浓度10XT4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液Tris-Cl(1mol/L,pH8.0)酶和缓冲液T4噬菌体多核苷酸激酶野生型T4噬

寡核苷酸5'末端磷酸化实验

            试剂、试剂盒 T4噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 Tris-Cl T4噬菌体多核苷酸激酶 寡核苷酸 [γ-

用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验

本方案主要描述了筛选噬菌体 M13 重组克隆,而一种选择方案是筛选含噬菌粒的细菌克隆。最后也介绍了用 PCR 检测突变体的方法。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验方法原理试剂、试剂盒甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核

用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验

            实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵 寡核苷酸杂交溶液 寡核苷酸预杂交

用放射性标记的寡核苷酸杂交筛选定点诱变重组克隆实验

实验方法原理 试剂、试剂盒 甲酸铵寡核苷酸杂交溶液寡核苷酸预杂交液TE噬菌体T4多核苷酸激酶限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变寡核苷酸[γ-32P]ATP2XYT 顶层琼脂和 2xYT 琼脂平皿仪器、耗材 钝端镊子皮下注射用针头(18 号)和印度墨水孵箱硝酸纤维素膜或尼龙膜真空烤箱68°C 水浴What

25 个引物相关的问题

1.      引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合

引物合成相关问题25答

  1. 引物是如何合成的?  目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和

引物合成详解

  1. 引物是如何合成的?   目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不

引物合成详解

  1. 引物是如何合成的?   目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不

25 个引物相关的问题

1.      引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪,可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合

用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端

这一实验方案分为 6 个阶段。第 1 阶段:降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 阶段:完整 RNA 去帽; 第 3 阶段:RNA 寡核苷酸的制备; 第 4 阶段:RNA 寡核苷酸与细胞 RNA 的连接; 第 5 阶段:反转录; 第 6 阶段:扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子杂交

一、杂交通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的

UPLC SYNAPT 二级质谱方法用于 siRNA 寡核苷酸结构确证

简介 RNA 干涉( RNAi )机制在转录后基因沉默中有根本性的作用,在已知序列的情况下,基因沉默常规实验可通过使用 ~21 个核苷酸( nt )长度的合成 RNAi 探针进行,此法也用于研发药物。合成 RNAi 寡核苷酸须纯化以防靶点外的基因沉默。 RNAi 药物需要良好的实验描述,以达到法规要

分子杂交技术 -1

互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。  杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方

寡核苷酸的优化设计

关键词:寡核苷酸;优化设计中图分类号:Q524     在核酸分子杂交、DNA序列测定和通过PCR放大DNA片段等实验中,都需要使用寡核苷酸作为探针或引物,而对这些反应的质量起最重要影响作用的,就是这些寡核苷酸探针或引物。用优化的寡核苷酸进行实验能够很快得到好

用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端

            试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 仪器、耗

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

嘌呤核苷酸的合成代谢(一)

  一、嘌呤核苷酸的合成  体内嘌呤核苷酸的合成有两条途径:①利用磷酸核糖、氨基酸、一碳单位及CO2等简单物质为原料合成嘌呤核苷酸的过程,称为从头合成途径(denovo synthesis),是体内的主要合成途径。②利用体内游离嘌呤或嘌呤核苷,经简单反应过程生成嘌呤核苷酸的过程,称

用化学常识解释转基因

  河南日报退休高级编辑,大河健康报退休总编,河南农大兼职教授,中国新闻奖获得者。  各位女士、各位先生:  大家好。大家都是经常来图书馆借书、看书的读者,如今喜欢看书的人真是难能可贵。看年龄,大家多数是60后、50后,少数是70后、40后。大家可能都不是生物专业的大学生,但是大家在中学阶段都学过化

寡核苷酸指导的单链 DNA 诱变实验

本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术(1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法(1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基,因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的(见方案 1)