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多聚酶链式反应技术(PCR技术)(2)

(2)反应增强剂:PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%~10%二甲基亚砜(DMSO)、5%~20%甘油、非离子去污剂、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量,有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。(3)热启动PCR:如果PCR反应混合物置于低于Tm值温度时,会在极短时间内产生引物二聚体和非特异性配对,而热启动PCR方法则可大大减少这种情况的发生。具体方法是:先将PCR反应体系升温至95℃,预变性2~5 min后,将仪器设在暂停,在这一高温条件下迅速加入耐热DNA聚合酶后再恢复循环。热启动可以防止模板变性不充分,同时还避免了耐热DNA聚合酶活性的迅速下降。 四、PCR技术的主要用途1. 目的基因的克隆 PCR技术为在重组DNA过程中获得的目的基因片段提供了简便快速的扩增方法。该技术可用于:①与逆转录反应相结合,可以直接从组织和细胞的mRNA获得目的基因片段;②利用特......阅读全文

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(2)

(2)反应增强剂:PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%~10%二甲基亚砜(DMSO)、5%~20%甘油、非离子去污剂、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量,有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。(3)热启动PCR:如果PCR反应混合物置于低于Tm

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最

多聚酶链式反应技术(PCR技术)

  多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。  PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究

多聚酶链式反应技术(PCR技术)(1)

多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应

多聚酶链式反应PCR

多聚酶链式反应PCR :(1)PCR原理:在模板DNA、引物和4种脱氧单核苷酸存在的条件下依赖于耐高温的DNA聚合酶的酶促合成反应。以欲扩增的DNA做为模板,以和模板正链和负链末端互补的两种寡聚核苷酸做为引物,经过模板DNA变性、模板引物复性结合、并在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应来合成新的模

多聚酶链式反应的原理

  多聚酶 链式反应的原理类似于DNA的天然 复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡 核苷酸 引物,经 变性、退火和延伸若干个 循环后,DNA扩增2n倍。  1.变性:加热使模板DNA在 高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链,即变性阶段。  2.退火:使溶液温度降至

聚合酶链式反应(PCR)技术

原理聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR)是一种体外扩增特异性DNA片段的技术。它可以在体外特异地对目的基因进行大量扩增,其巧妙之处在预先设计合成二段分别与待测目的基因二端互补的引物,以起到指向定点的作用;再借助于DNA聚合酶催化的若干次扩增反应后,即可使特

PCR (多聚酶链反应)

【实验目的】掌握PCR技术的原理,学习PCR技术的基本方法,了解PCR技术的应用范围与意义。【实验原理】详见14章第2节。【实验对象】特定的DNA序列。【试剂与器材】引物(primer),根据需扩增的DNA设计相应的引物;TagDNA聚合酶; 10×PCR缓冲液(随酶一起购买);5mmol/L dN

聚合酶链式反应(PCR)技术概述

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术是基因扩增技术的一次重大革新,是分子生物学发展史中的一个重要里程碑。使用PCR扩增技术,可以将极微量的靶DNA片段特异地扩增上百万倍,大大提高了对DNA分子的分析和检测能力。PCR技术具有敏感度高、特异性强、快速简便等优