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小鼠胚胎干细胞培养实验——体外分化法

小鼠胚胎干细胞培养可以:(1)细胞保种;(2)用于干细胞研究;(3)用于细胞生理学、形态学等研究;(4)动物克隆。实验方法原理胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择(第3步),在有bFGF存在的情况下扩增(第4步)并最终分化在第5步。细胞全程培养在37℃,5%CO2,100%湿度条件下。一般体外诱导向神经细胞方向分化,也可以采用低浓度的RA进行诱导。实验材料小鼠试剂、试剂盒明胶PBSDMEM马血清L-谷氨酰胺HEPESβ-巯基乙醇PESTLIF仪器、耗材培养板离心管水浴锅离心机6孔板24孔板实验步骤一、ES培养基 在LIF存在的条件下维持细胞培养。 二、EB培养基 使用细菌培养皿去除LIF后胚状体的形成需要4天。 1. 分散纯化细胞(参见上面的细胞传代部分)。 2. 纯化2小时后将细胞转入......阅读全文

2012国家自然科学基金哪些干细胞项目资助金额最大

  国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录科学基金网络信息系统(https:

笹井芳树:培养皿中长出视网膜

视网膜  科学家已经可以诱导干细胞形成视网膜,这为很多眼疾患者带来希望。  在子宫里,一团相同的细胞分化成各种不同的模样,最终形成高度有序的结构,组装成人体的全副器官。这个过程依照内在的“生物学蓝图”有条不紊地进行,引导组织产生折叠、皱褶,精确形成适当的外形和大小。  科学家很熟悉这个由简单到复杂的

如何高效培养人类多能干细胞?

人类多能干细胞(hPSCs)因其拥有分化为机体所有类型细胞的能力,使得hPSCs成为研究发育机制以及疾病机理最常用的工具,同时在再生医学以及疾病治疗领域也有非常广泛应用。人类多能干细胞因其来源不同又可分为胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs)和诱导多能干细胞(induce

干细胞分离研究获新突破

日本近年来在干细胞研究领域获得了多项举世瞩目的成就,如利用干细胞治疗猴子帕金森症、治耳聋等。现在,日本干细胞研究成果再填一项重要进展。日本理化研究所的研究人员近日宣布,他们成功分离出小鼠卵巢荚膜的干细胞。 生殖是关系到生物种群能否延续的重要生命活动,但围绕精子和卵子是怎样形成的依然有许多疑问。科学

如何高效培养人类多能干细胞

人类多能干细胞(hPSCs)因其拥有分化为机体所有类型细胞的能力,使得hPSCs成为研究发育机制以及疾病机理最常用的工具,同时在再生医学以及疾病治疗领域也有非常广泛应用。人类多能干细胞因其来源不同又可分为胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs)和诱导多能干细胞(induced

专家解读“人兽”之惑

布莱尔最后的“大礼” 6月27日,托尼·布莱尔卸任英国首相。尽管人们对于布莱尔执政10年来的表现毁誉参半,但布莱尔在卸任前实实在在地为英国科学家献上了一份“大礼”。5月17日,英国政府批准了一项法律草案,允许科学家进行人兽混合胚胎研究。布莱尔在离职演讲中说:“为了这个国家,我竭尽全力做了自

动物实验基本技术-3

第七节 实验动物的处死当实验中途停止或结束时,实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物,原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦,也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。一、蛙 类常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的

日本用小鼠胚胎干细胞高效培育小脑神经细胞

  日本理化学研究所9月13日发布新闻公报称,该所研究人员成功诱导小鼠胚胎干细胞,有选择性地分化成小脑神经细胞,且实现了较高的分化效率。  公报说,小脑皮质中层内的浦肯雅细胞是掌管精确运动和学习的主要神经细胞,在医学方面具有相当重要的作用,以往诱导胚胎干细胞有选择性地分化成浦肯雅细胞的方法

基因敲除的原理与方法

基因敲除可以说是基因组 学、细胞分离培养以及转基因技术的组合。那么基因敲除的原理是什么呢? 基因敲除的方法有哪些呢?在此,做个小结,以供大家学习。一.概述:基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子 生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用D

小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化

实验概要小鼠胚胎干细胞向神经干细胞的定向诱导分化主要试剂无菌水、0.1%明胶、DPBS、0.05%Tripsin、fibronection、Laminin、细胞基础培养液、N2B27培养液、mES培养液C、小鼠EB培养基、神经干细胞培养液(NSC培养液)主要设备35 mm、100 mm培养皿、12孔

克隆技术研究现状

一、克隆的早期研究    克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁殖系。同一克隆内所有成员的遗传构成是完全相同的,例外仅见于有突变发生时。自然界早已存在天然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实际上就是一种克隆。然而,天然的哺乳动物克隆

原代胚胎成纤维细胞培养

原代胚胎成纤维细胞培养             实验方法原理 细胞培养是模拟机体内生理条件,将细胞从机体内取出,在人工条件

常用的分子生物学基本技术2

IS PCR的技术特点 (1)既具有PCR的特异性与高灵敏性,又具有原位杂交的定位准确性;(2)测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列,甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA;(3)有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析;(4)可用于正常或恶性细胞,感染或非感染细胞的鉴定

动物实验基本技术-4

三、实验动物的准备本文主要叙述制备转基因鼠的实验程序。(一)不育雄性公鼠:结扎公鼠与母鼠交配以后产生假孕母鼠。受结扎的公鼠需8周以上,对种系无特殊要求。在正式实验前,结扎公鼠需与性成熟的雌性小鼠交配,反复交配两次或三次,经检查雌体有阴道栓,但均不怀孕产仔,则证明结扎成功。结扎公鼠使母鼠产生阴道栓的能

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

原代胚胎成纤维细胞培养

实验方法原理细胞培养是模拟机体内生理条件,将细胞从机体内取出,在人工条件下培养,使细胞生存、生长、繁殖和传代,从而可以进行细胞生命过程、细胞癌变等问题的研究。由体内直接取出组织或细胞进行细胞培养叫做原代细胞培养,也有的把第1代细胞与传10代以内的细胞培养统称为原代细胞培养。一般来说,用幼嫩状态的组织

实践十号将在太空做19项新奇有趣实验

  中国6日发射的实践十号返回式卫星上,将在未来两周进行19项新奇又有趣的实验,既寻找人类未来宇宙生存之法,又助人类在地球上的生活更美好。  这颗卫星的首席科学家、中科院院士胡文瑞说:“实践十号上开展的科学实验都是全新探索,都是国外没有开展过的,每个都具有创新性和很强的科学研究价值,将孕育学术上重大

电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用

  Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning   郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu   第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038   Insti

电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用

  郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu   第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038   Institute of Orthopedic Oncology, Fourth Military Medical University, Xi''an 710038

电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用

Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning 郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu 第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038 Institute of Orthop

电穿孔技术在转基因及动物克隆中的应用

Application of Electroporation in Gene Transfer and Animal Embryo Cloning郝新保 范清宇 Hao Xin-bao Fan Qing-yu第四军医大学全军骨肿瘤研究所 西安 710038Institute of Orthopedi

NBT特别关注丨6位大咖指引心肌干细胞领域“再生”

  2018年,Anversa实验室超过30篇文章由于造假而撤稿,这一事件对于心肌细胞治疗领域带来了非常负面的影响。在过去的18年间,许多医生和科学家以此不实结论花费数年进行的科学研究变得毫无意义,不仅使病人蒙受了极大的损失,在该领域里投入的数百万计资金也付之东流。然而,骨髓细胞或者是成体驻留的心肌

中国科学家实现体外非人灵长类动物胚胎原肠发生过程

  对人类来说,有没有比出生、死亡或婚姻更重要的事?  科学家认为有。早期胚胎发育关乎生命本源,一直是生物学研究的热点和难点。尤其是推动细胞有序迁移并分化形成三个胚层的原肠运动,更被认为是包括人类在内的灵长类动物发育的里程碑事件。  北京时间11月1日,美国《科学》杂志在线发表了中国科学院动物研究所

克隆技术(十二)

应用前景奇妙的克隆克隆技术已展示出广阔的应用前景,概括起来大致有以下四个方面:(1)培育优良畜种和生产实验动物;(2)生产转基因动物;(3)生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法;(4)复制濒危的动物物种,保存和传播动物物种资源。以下就生产转基因动物和胚胎干细胞作简要说明。克隆山羊转基因动物研究是动

mESCs建系

实验概要mESCs建系主要试剂细胞基础培养液、DPBS、0.25%Trypsin、0.1%明胶、兔抗鼠全血清原液、豚鼠补体、0.5%链蛋白酶、冲胚液、培养液A、mESCs培养液B主要设备35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、体视镜、注射器、镊子、虹膜剪实验材

与中科院空间科学卫星科学研究联合基金项目指南

一、设立宗旨 空间科学卫星科学研究联合基金由国家自然科学基金委员会与中国科学院共同出资设立,旨在发挥国家自然科学基金的导向和协调作用,吸引和调动全国高等院校、科研机构的研究力量,充分利用中国科学院研制的空间科学卫星平台开展前沿领域和综合交叉领域研究,开拓新的研究方向,发挥空间科学卫星的效能

迎难而上,类器官的血管化研究的破茧之路

类器官(Organoids)是将具有干性潜能的细胞在体外进行3D培养,形成多种特异性细胞类型集合的微器官团,能够体外再现真实器官的三维构造及生理功能。然而体外培养的类器官往往缺乏有效的血管,随着类器官体积的增加,缺氧及代谢废物累积导致细胞凋亡,最终致使组织坏死,因此目前培养的类器官无论是形态大小还是

小鼠胚胎干细胞培养实验

体外分化法             实验方法原理 胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经

小鼠胚胎干细胞培养实验

体外分化法             实验方法原理 胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经

胚胎显微操作-细胞核移植

(一)概况   哺乳动物核移植是指将胚胎单个卵裂球或体细胞核(核供体)移入去核的成熟卵母细胞或受精卵(核受体)中,采用一定的方法激活卵母细胞,使核供体和核受体融合为重构胚,经移植后发育成新个体的技术。通过核移植,可以不经过有性繁殖过程,连续不断地复制遗传上相同的胚胎,再借用胚胎移植技术,生