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细胞冻存实验

实验方法原理 在不附加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内外环境中的水会结成冰晶,能导致细胞发生一系列变化,如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变、蛋白质变性等等,最终导致细胞死亡。但如向细胞培养液中加入保护剂甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使冰点降低,在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,可避免上述现象的发生。冻存在-135 ℃以下低温中,能减少冰晶的形成。而融化细胞时速度则要快,使之迅速通过最易受损的-5~0 ℃以后,细胞活力不受损害,仍能生长增殖。当前最常用的保护剂仍为甘油和DMSO,它们对细胞无毒、分子量小、溶解度大、易穿透细胞,使用范围在5%~15 %之间,常用10 %。实验材料 细胞试剂、试剂盒 胰蛋白酶BSSDMSO仪器、耗材 吸管离心管玻璃安瓿酒精灯线绳纱布口袋搪瓷罐实验步骤 一、冻存1. 细胞选项对数生长期细胞;收集细胞24 小时前换液一次;2. 计......阅读全文

细胞冻存实验

方案20.1 冷冻细胞             实验方法原理 细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷

细胞冻存实验

细胞冻存实验可以用于:(1)妥善贮存细胞;(2)维持细胞生存;(3)节约人力、物力、时间及减少污染机会;(4)维持细胞发生遗传性状的稳定。实验方法原理细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷冻。细胞冻存时向培养基中加入保护剂,即终浓度5%.15%的甘

细胞冻存实验

方案20.1 冷冻细胞             实验方法原理 细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷

细胞冻存实验

实验方法原理细胞生长至对数晚期,以培养基制备高浓度细胞悬液,加入细胞保护剂,等份转移至冻存管中,缓慢冷冻(图 20.8)。细胞用胰酶消化后,加入含有细胞保护剂的培养基,分装至冻存管中,然后将其夹到铝条上,用纸质管包裹,放入隔热储存管中。将储存管及其内容物于-70℃或-80℃存放4h或过夜,最后将含有

细胞冻存实验

实验方法原理 在不附加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内外环境中的水会结成冰晶,能导致细胞发生一系列变化,如机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH 改变、蛋白质变性等等,最终导致细胞死亡。但如向细胞培养液中加入保护剂甘油或二甲基亚砜(DMSO),可使冰点降低,在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水分在

复苏冻存细胞实验

实验方法原理快速复苏细胞,缓慢稀释,以高细胞密度重新接种(图20.9)。实验步骤材料无菌培养瓶(如果需要离心时)生长培养基吸量管,1ml,10ml注射器和19号针头(如果你使用玻璃冻存管)非灭菌保护性手套和面罩37℃无菌水,10cm深,盛于清洁、用乙醇擦拭过的带盖的水桶中镊子70%乙醇棉签1%萘黑(

复苏冻存细胞实验

方案20.2 复苏冻存细胞实验             实验方法原理 快速复苏细胞,缓慢稀释,以高细胞密度重新接种(图20.9)。

细胞的冻存与复苏实验_液氮冻存法

实验方法原理目前长时间保存细胞的方法是将细胞低温冻结保存在液氮中(-196 ℃),保存时间可长达一年甚至几年,用时解冻,大多数细胞仍能生长繁殖,为妥善起见,细胞冻存一年后应复苏培养后再冻存。冻存细胞时应加入保护剂,否则,细胞内外的水会结成冰晶,使细胞发生机械损伤。加入保护剂后,可使冰点降低,在缓慢冻

细胞冻存和复苏实验

细胞冻存和复苏             实验方法原理 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种

细胞冻存和复苏实验

细胞冻存和复苏可以:(1)用于生物学保种;(2)用于医学上干细胞研究;(3)用于传代培养。实验方法原理细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融,实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减