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方案2反相微型层析柱的制备实验

实验材料用于质谱分析的蛋白质或多肽样品试剂、试剂盒乙腈(HPLC级)甲醇基质溶液三氟乙酸仪器、耗材平头镊子GELoader 移液吸头MALDI-MS板移液吸头Poros R1、Poros R2 或 Oligo R3 层析树脂注射器实验步骤1.将 GELoader 移液吸头的尖端压扁。图 8.32 所示为两种最常用的操作方法:(1)将 GELoader 移液吸头的细端平放在坚硬的表面上,用一个 1.5 ml 的微量离心管滚过移液吸头尖端约 Imm 的部位。(2)用平头镊子挤压 GELoader 移液吸头的尖端,然后将移液吸头旋转一圈,以封闭其末端。2.制备溶于 70% 乙腈的层析树脂(PorosR1、PorosR2 或 Oligo R3) 悬液 100~200ul(约 1.5 mg 树脂/100ul 乙腈)。步骤③~⑧的操作如图 8.32(b) 所示。3.把 20ul 70% 的乙腈装人压扁的 GELoader 移液吸头的尖端,在......阅读全文

质谱在蛋白质组学中的应用实验

方案1 蛋白质和多肽 MALDI-MS 分析的一般方法 方案2 反相微型层析柱的制备实验 方案3 固定化酶微型层析柱的制备 方案4 用于蛋白质组分析的微毛细管 HPLC 色谱及 ESI —体化装置的制备和使用 方案5 利用 Nano-LC

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒 无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇:水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材 MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤 材料缓冲液和溶液稀释缓存液至

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

            试剂、试剂盒 无菌的过滤水 乙腈 乙酸铵 正丁醇 不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液

聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化寡核苷酸实验

试剂、试剂盒无菌的过滤水乙腈乙酸铵正丁醇不含指示染料的甲酰胺凝胶加样缓冲液甲酰胺指示染料混合液甲醇:水溶液寡核苷酸洗脱缓冲液TE 溶液合成寡核苷酸粗制品仪器、耗材MillexHV 滤器石蜡封口膜或荧光薄层层析板Sep-Pak 传统层析柱注射器紫外灯水浴加热器实验步骤材料缓冲液和溶液稀释缓存液至适当浓

方案3 固定化酶微型层析柱的制备

实验材料用于质谱分析的蛋白质或多肽样品试剂、试剂盒NH4HCO3(50mmol LpH7.8测序级)乙腈仪器、耗材镊子GELoader 移液吸头移液吸头固定化胰酶层析树脂注射器实验步骤1.GELoader 移液吸头的尖端压扁。具体方法参见方案 2(图 8.32)。2.将 100ul 50 mmol/

反相高效液相色谱2

方案2 填充 RP-HPLC 毛细管微柱试剂、试剂盒甲醇n-丙醇反相硅胶TFA 乙腈溶剂体系仪器、耗材水浴超声波仪色谱加样器层析柱玻璃料末端接口环氧树脂流动池正向光学扫描检测器加热枪加样器液相色谱柱填充泵微柱聚丙烯离心管聚硅酸盐管蓝宝石切刀信号数据收集装置硅胶隔膜Teflon接头UV检测器实验步骤一

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

试剂、试剂盒 包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材 Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤 材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(Fi

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

            试剂、试剂盒 包涵体沉淀 缓冲液 A 脱氧胆酸钠 N-十二烷基肌氨酸钠

第四届制药分离纯化技术与学术大会(第四轮通知)

  第四届制药分离纯化技术与学术大会将于9月21日-22日在苏州独墅湖世尊会议中心举办,前三届累计参会人数超过1500多人,技术学术大会同技能培训班结合获得广泛好评和赞誉,已成为制药分离纯化领域的专业盛会,诚挚欢迎您及同行朋友们前来交流和学习。本届大会由苏州工业园区医药分离纯化产业联盟协会主办,以“

包涵体沉淀(σ32)的溶解、重折叠和离子交换层析实验

试剂、试剂盒包涵体沉淀缓冲液 A脱氧胆酸钠N-十二烷基肌氨酸钠仪器、耗材Tissuc-TearorTM 匀浆器透析袋POROS 50S 阳离子交换柱SDS-PAGE 电泳装置实验步骤材料与设备包涵体沉淀 (见实验 1,P.147)Tissuc-TearorTM 匀浆器(FisherScie

M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应...

M13 噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术中的应用实验实验材料 羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒 生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-T 缓冲液PBS-T-BSA 缓冲液仪器、耗材 2YT 培养基SOC 培养基实验步骤 下述方法描述了 P8 库的设计(见 12.3.1)、构建(见

M13噬菌体衣壳蛋白改造在改良噬菌体展示技术的应用实验

本章描述了改进融合蛋白在 M13 噬菌体颗粒表面展示水平的一个方法。向 M13 衣壳锚定蛋白引入突变后,蛋白质展示水平约能增加两个数量级。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料羧苄青霉素氯霉素大肠杆菌 CJ236试剂、试剂盒生理磷酸缓冲液超纯甘油PBS-

亲和层析实验:常规方法

实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。

亲和层析实验:常规方法

实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过

PK-120 的纯化及肽段氨基酸序列分析实验

基本方案             实验方法原理 实验材料

膜蛋白的纯化实验(二)

三、膜蛋白的纯化一 旦 使 用 了 合 适 的 去 污 剂 将 膜 蛋 白 从 细 胞 膜 中 増 溶 出 来 ,就 可 以 分 离 目 标 蛋 白 质 了 。传 统 色 谱 层 析 技 术 ,如 凝 胶 过 滤 、亲 和 、离 子 交 换 和 层 析 聚 焦 (chromatofocusi

膜蛋白的纯化实验

实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近,人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同

膜蛋白的纯化实验

实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法,因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能

cDNA 文库的构建

            实验材料 λ噬菌体臂 大肠杆菌菌株 用于λ噬菌体的包装抽提物 试剂、试剂

蛋白纯化经验指南-1

蛋白纯化经验指南生物谷整理 http://www.bioon.com  原创:Chromatography weixingui@263.net, 推荐书籍:《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1) 我现在手头

环渤海色质谱学者精彩报告纷呈 贯彻“绿色化学”理念

  分析测试百科网讯 2016年8月11日,由辽宁省分析测试协会,辽宁省分析科学研究院主办的“第四届环渤海色质谱学术报告会暨辽宁省第十届学术年会分会”在丹东召开(相关报道:第四届环渤海色谱质谱学术会在丹东开幕 首次发布徽标)。大会上,众位环渤海的

东曹:生物医药领域的分离专家

  【导语】生物医药是二十一世纪发展前景最诱人的一个产业,无论是全球的市场规模、跨国药企在中国的投入,还是中国相关的CRO外包产业、“十二五“规划的预期和投入,都在迅猛地增长。生物医药产业链条中的几乎每一步都离不开分离纯

cDNA 文库的构建

此经典方案建立在 Gubler-Hoffman 法(Gulber-Hoffman 1983) 之上,分为六个阶段。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。实验材料λ噬菌体臂大肠杆菌菌株用于λ噬菌体的包装抽提物试剂、试剂盒放线菌素 D二硫苏糖醇EDTATris-ClMgCl2反转录酶

用于HPLC-SEC分析的超纯水

高效液相色谱(HPLC)是一种进行物质分离、鉴定和定量的分析方法。与其它通常采用梯度模式的各种生物聚合物HPLC(离子交换、疏水相互作用和反相色谱)不同,SEC(尺寸排阻色谱法)通常采用等度方法。 尺寸排阻色谱法 尺寸排阻色谱法(SEC)包括凝胶渗透色谱法(GPC)和凝胶过滤色谱法(在含水条

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

我们将方案分成三个阶段: 第一阶段介绍蛋白质的制备及蛋白质的荧光染料标记;第二阶段,通过转染或微注射将适当的探针成分导入细胞;第三阶段,图像的收集和分析过程。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料进行转染的细胞株按第二阶段所介绍的方法制备

GFP 和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验

            实验材料 进行转染的细胞株 按第二阶段所介绍的方法制备表达了蛋白质探针的细胞 试剂、试剂盒

蛋白质纯度测定实验(二)

方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的,因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以

蛋白质纯度测定实验

实验步骤在评价样品纯度之前,首先需要鉴定待测杂质的类型,如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质,进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征)。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是,上述说明中并没有要求描述杂质的性质。

蛋白质纯度测定实验

蛋白质纯度测定实验             实验步骤 在评价样品

紫外分析仪检测乳和乳粉中黄曲霉毒素M1

ICS 67.100.10X 04GB/T 18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和 荧 光 光 度 法Determination of aflatoxin M1 content in milk and milk powder-Cleanup by immu