Atlas™cDNA表达距阵(ExpressionArray)2
区分关系相近肿瘤的诊断工具分析在肿瘤发生中起关键作用的基因的表达588种与癌症相关的cDNA点阵于一带正电的尼龙膜上，另外还包括9个管家基因的质粒、噬菌体等阴性对照。cDNA按分子途径和家族分类置于不同板块，包括癌基因、抑癌基因、细胞周期相关基因和凋亡等。Atlas? Mouse cDNA Expression Array Cat#7741-1分析转基因或其他用小鼠作模型实验的基因表达分析小鼠进化或肿瘤发生的分子机制筛查在许多生命现象中起关键作用的基因588种小鼠cDNA 点阵于一带正电的尼龙膜上，另外还包括9个管家基因和质粒、噬菌体等阴性对照。CDNA如图所示按分子途径或功能分类置于不同板块。大量的基因图谱分析可以用于研究基因间的相互作用，以解释由基因的表达结果得到的表型现象.例如，比较不同疾病或不同进化阶段或实验的不同时间其基因表达的差异。基因表达图谱可以作为基因分类或定性的一个有力工具，也可以作为没有表型差异的小鼠的有力区......阅读全文
Atlas™cDNA表达距阵(Expression－Array)2
区分关系相近肿瘤的诊断工具 分析在肿瘤发生中起关键作用的基因的表达 588种与癌症相关的cDNA点阵于一带正电的尼龙膜上，另外还包括9个管家基因的质粒、噬菌体等阴性对照。cDNA按分子途径和家族分类置于不同板块，包括癌基因、抑癌基因、细胞周期相关基因和凋亡等。 Atlas? Mouse cD
Atlas™cDNA表达距阵(Expression－Array)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开
Atlas#8482;cDNA表达距阵(Expression－Array)
AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array)同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析检测关键基因在细胞关键功能中的角色只需简单的杂交步骤就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－2
Materials and MethodsCell Culture, Interferon Treatment, and RNA PrecipitationMelanoma cells (ME-15) were cultured in RPMI 1640 with L-Glutamine suppl
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－3
Table 2 Modulation of microRNA expression by IFNα—4 and 24 h after stimulation Control Interferon-alpha treated
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－4
Bead-array-based microRNA detection technology, including the bio-statistic analysis, is currently not well established or widely used and we have app
MicroRNA－Expression－Profiling－by－Bead－Array－1
MicroRNA Expression Profiling by Bead Array Technology in Human Tumor Cell Lines Treated with Interferon-Alpha-2aMicroRNAs are positive and negative r
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）2
在双链 DNA 分子中，只有一条链转录成 mRNA，这条链称为有意义链(sense strand)，该基因的另一条链则称反意义链(antisense strand)。在含有许多基因的 DNA 双链中，每个基因的有意义链并不是在同一条 DNA 链上。也就是说，一条链上既具有某些基因的有意义链，
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（2）
一．毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制1．1 各种母液的配制10*YNB （含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基） 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基（无硫酸铵）+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。500*B （0.02%生物素 Biotin） 4℃保存 保存期为1年。2
原核表达（prokaryotic－expression）条件优化
影响E.coli 中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素[58]。由于Vector NTI suitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）3
（3）原核生物的基因组基本上是单倍体，而真核基因组是二倍体。（4）如前所述，细菌多数基因按功能相关成串排列，组成操纵元的基因表达调控的单元，共同开启或关闭，转录出多顺反子(polycistron)的mRNA；真核生物则是一个结构基因转录生成一条mRNA，即mRNA是单顺反子(monocistron)
SDSPAGE检测蛋白表达(protein－expression)
一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8；电泳缓冲液，PH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪等；蛋白Mar
克隆基因的表达（expression－of－cloned－gene）1
基因表达(gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。基因的表达主要涉及到两个过程：转录和翻译。 第一节影响外源基因表达的因素 利用基因工程技术高水平表达
自动化的微流控芯片系统在单细胞中检测MicroRNA的异质性3
结论· 我们在C1TM单细胞自动制备系统开发了一种简洁的实验方案，能以最少的手工操作，在不到24小时内，平行处理高达96个单细胞，对其miRNA表达谱进行分析。· C1 miRNA STA实验方案使用了Life Technologies为miRNA优化过的试剂。特别的，Megaplex™ RT及
如何做原核表达（prokaryotic－expression）(一)
人们合成与生物相关的物质是从尿素开始的，1828年，德国化学家维勒人工合成了存在于生物体的这种有机物。在1960年我国科学家采用化学方法首次成功地合成了具有生物活性的蛋白质——胰岛素。随着内切酶的发现和基因工程技术的发展，人们发现用各种不同的载体在原核、真核系统中进行蛋白表达更为行之有效。而这其中大
如何做原核表达（prokaryotic－expression）(二)
几个常用的启动子和诱导调控表达系统最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子，由 启动子Plac + 操纵基因lacO +结构基因组成。其转录受CAP正调控和lacI负调控。lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录，该启动子在转录水平上只受lacI 的调控，因而随后得到了更广泛采用。la
cDNA的筛选2
（三）免疫筛选制备Sepharose偶联细菌裂解液1.各用一个E.coli温度敏感溶源菌株（BTA 282（λgt11amp3）或BNN 97）单菌落接种于2×7.5ml培养基并于32℃生长过夜。2.过夜培养物用LB培养基稀释100倍，于32℃生长至OD600值为0.5。3.于45℃温育15min诱
cDNA合成技术2
3. 第一链产量测定第一链掺入率(%)= 掺入cpm/总cpm ×100%掺入dNTP(nmol)=2nmol dNTP/μl ×反应体积(μl)×(第一链掺入率)设330为每mol dNTP的平均分子量合成cDNA量(ng)=掺入dNTP (nmol)×330ng/nmolmRNA向cDNA转变率
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（3）
液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（4）
三．主要试验环节的操作3.1 酵母菌株的分离纯化接种GS115于5ml YPD液体培养基，30℃，200rpm振荡过夜，涂布 YPD平板，30℃培养48 小时，用 YNB基本培养基和含His的补充培养基作点种分离纯化，挑选在补充培养基生上生长而在基本培养基上不生长的单菌落划YPD平板，4℃保存。3.
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（6）
随着PCR技术的不断发展成熟（扩增长度、保证性、产量和特异性等），质粒构建过程的大多数细胞内的DNA复制将被PCR这一细胞外的DNA复制所代替，质粒构建效率将有质的飞跃。4.4密码子的偏好性的原则酵母菌对外源基因的表达也和外源基因密码子的选用有关。了解表达系统宿主在密码子使用上的偏爱性对从翻译水平分
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（1）
大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、周期短、生产成本低。然而，许多蛋白质在翻译后，需经过翻译后的修饰加工，如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制，不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外，蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构，在
毕赤酵母表达（pichia－pastoris－expression－）实验手册（5）
3.5 Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法3.5.1 模板的处理：1. 平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）；2. 将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非
Detection－of－MicroRNA－Heterogeneity－in－Single－Cells－Using－an－Automated
Introduction MicroRNA (miRNAs) are short (18–24 nucleotides), non-coding RNAs that regulate gene expression by both disrupting messenger RNA (mRNA
cDNA－文库的构建2
阶段 3:cDNA 的甲基化 材料 缓冲液和溶液 将贮存液稀释到合适浓度。 氯仿 10XEcoRⅠ 缓冲液 1XEcoRⅠ 甲基化酶缓冲液（选用) 如希望，可替代步骤 1 中的 Tris-HCl,NaCl 和 EDTA。 EDTA(0.5mol/L,pH8.0) 乙醇 MgCl2(
cDNA文库的构建2
10. Sephadex G-50用含有10 mmol/L NaCl的TE(pH7.6)溶液进行平衡，然后通过离子柱层析将未掺入的dNTP和 cDNA分开。11. 加入0.1倍体积的3mol/L乙酸钠（pH5.2）和2倍体积的乙醇，沉淀柱层析洗脱下来的cDNA，将样品置于冰上至少15分钟，然后在微量
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达最灵敏，最可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和同时分析内
PCR－Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（三）
RT2 PCR Profiler Arrays可用于生物学和医学研究的各个领域，包括：癌症研究、炎症和细胞因子分析、干细胞研究、神经生物学、信号转导通路研究、细胞黏附和细胞迁移、生物标记分子筛选和验证截止目前，QIAGEN 拥有ZL申请的PCR Array可以分析超过150条通路和特异的疾病类型。具
PCR－Array——基因表达分析疾病和信号通路的利器（二）
RT2 Profiler PCR Array操作流程 首先将RNA样本反转录成cDNA第一链，作为PCR模板；接着将cDNA模板与合适的即用型PCR预混液混合，等体积加入到已经固定好基因特异性引物的同一个孔板的每个孔中，然后即可运行real-time PCR循环程序。RT2 Profiler PCR
PCR－Array－简单实用的检测基因表达的高通量方法
简介：什么是PCR芯片？实时定量PCR是检测基因表达zui灵敏，zui可靠的方法。通过在试验过程中，实时监测荧光染料的信号变化，反映样品中的基因拷贝数。实时定量PCR线性范围广（能达到5个数量级），因此可以检测同一样品中表达量极低的基因和表达量很高的基因。但是，由于实时定量PCR需要制备标准曲线和