印迹转移电泳

生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southren创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southren印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Northern印迹,1979年Towbin等设计了将蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜的装置,将蛋白质转移到膜上,再与相应的抗体等配体反应,被戏称为Western印迹,这种装置将膜和凝胶、滤纸等制成夹心饼干状,用低电压高电流电泳完成转移。1982年Reinhart等用电转移法将等电聚焦后的蛋白质区带从凝胶转移到特定膜上,称Eastern印迹。目前国内外有多种核酸、蛋白质印迹转移的电泳装置出售,使印迹转移速度快效率高、重复性好,应用更加广泛。聚丙烯酰胺凝胶也可用于印迹转移电泳,但转移蛋白质时,凝胶中不可含有SDS、尿素等变性剂。用于转移电泳的支持膜亦......阅读全文

印迹转移电泳

生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southren创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southren印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Northe

转移电泳槽

 蛋白转移电泳槽Tanon-186产品介绍:转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置。专用开启式转移胶架,操作简便。专用槽内制冰盒,可预制冰块置于槽内,在转移电泳过程中起降温作用。可同时转印二块83×73mm胶,做到一槽多用,可节省实验空间和实验经费。产品特点:1.槽体采用高强度高透

DNA印迹法实验步骤转移的相关介绍

  1)取一个较大的方形瓷盘,放一块玻璃板于盘上,盘内加转移液(6×SSC或10×SSC)使液面距离玻璃底面约1,2cm,玻璃板表面盖两张预先用转移液浸润的Whatman 3M ·滤纸(也可用新华滤纸),滤纸两端浸入SSC转移液中,用一玻璃棒将滤纸压平,滤纸与玻璃板间不得有气泡,  2)将琼脂糖凝胶

电泳做Western免疫印迹操作步骤

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。1、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶

Western-blotting电泳免疫印迹简单原理

免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。Western Blot是检测单一细胞蛋白表达量最好的方法;若要对表达蛋白进行细胞定位,confocal应是首选的方

转移电泳技术介绍

生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southern印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Northe

蛋白转移电泳槽

转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置。开启式转移胶架,操作简便。槽内制冰盒,可预制冰块置于槽内,在转移电泳过程中起降温作用。可同时转印二块83×73mm胶,做到一槽多用,可节省实验空间和实验经费。产品特点:1.槽体采用高强度高透明度聚碳酸脂材料注塑成型,免除液体渗漏、便于观察电泳

Southern-印迹实验——向下毛细管转移法

实验方法原理向上毛细管转移法的一个缺点是凝胶可能被加于其上面的加有重物的滤纸层和纸巾塔压紧,从而降低毛细管作用。实验材料DNA试剂、试剂盒SSC仪器、耗材转移塔滤纸实验步骤一、实验步骤1.  按印迹法步骤1~4(高盐转移)所述处理凝胶。2.  如下图所示,安装转移塔,其组成依次为(1)置于一玻璃平皿

核酸蛋白转移电泳及杂交

一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位,尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性,对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值,其过程包括:样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异性D

蛋白转移电泳槽开启式转移胶架,操作简便

产品介绍:转移电泳槽是用来对少量核酸及蛋白质样品进行转移电泳的装置。开启式转移胶架,操作简便。槽内制冰盒,可预制冰块置于槽内,在转移电泳过程中起降温作用。可同时转印二块83×73mm胶,做到一槽多用,可节省实验空间和实验经费。产品特点:1.槽体采用高强度高透明度聚碳酸脂材料注塑成型,免除液体渗漏、便

琼脂糖转移电泳的相关介绍

  生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southern印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Nort

什么是-电荷效应-浓缩效应-转移电泳

电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,扩散和对流都比较强,影响分离效果。所以出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很

琼脂糖的转移电泳的基本内容

  生物化学与分子生物学的研究工作经常需要对电泳分离后的DNA进行分子杂交,但琼脂糖不适合于进行杂交操作,1975年,Southern创造了将DNA区带原位转移到硝酸基纤维素膜(NC膜)上,再进行杂交的方法,被称为Southern印迹法。随后,Alwine等将类似方法用于RNA印迹,被戏称为Nort

Southern印迹(毛细管法将DNA转移到膜上)

制备基因组 DNA 样品首先要经过一种或多种限制性内切核酸酶的消化,消化后的片段在标准的琼脂糖凝胶上经电泳按照大小进行分离。DNA 经过原位变性后,从凝胶上转移到固相支持物上(通常为尼龙膜或者硝酸纤维素膜)。DNA 片段在向膜转移的过 程中被保留于相应的位置。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培

Southern印迹(毛细管法将DNA转移到膜上)

            实验方法原理 制备基因组 DNA 样品首先要经过一种或多种限制性内切核酸酶的消化,消化后的片段在标准的琼脂糖凝胶上经电泳按照大小进行分离。DNA 经过原位变性后,从凝胶上转移到固相支持物上(通常为尼龙膜或者硝酸纤维素膜)。DNA 片段在向

Southern印迹(毛细管法将DNA转移到膜上)

实验方法原理 制备基因组 DNA 样品首先要经过一种或多种限制性内切核酸酶的消化,消化后的片段在标准的琼脂糖凝胶上经电泳按照大小进行分离。DNA 经过原位变性后,从凝胶上转移到固相支持物上(通常为尼龙膜或者硝酸纤维素膜)。DNA 片段在向膜转移的过 程中被保留于相应的位置。实验材料 适当的限

Southern-印迹实验——印迹法

Southern印迹法是将DNA片段从电泳凝胶中转移至膜支持物上,使DNA片段固定,因此该膜半永久性地重现出凝胶电泳的带型。实验方法原理本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的,稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。实验材料DNA试剂、试剂盒HClNaClTrisNaOH

蛋白质印迹(westernblot)

实验原理印迹法一般由凝胶电泳;样品的印迹和固定化;各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。生物大分子凝胶电泳分离 蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳,使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。2.分子区带的转移和固定 第二步就是反凝胶电泳已分

蛋白质印迹实验——从等电聚焦凝胶上转移蛋白

试剂、试剂盒甘氨酸TrisSDS甲醇实验步骤1. 溶液配置不连续缓冲系统阳极缓冲液Ⅰ:0.3 mol/L Tris,pH 10.4。阳极缓冲液Ⅱ:0.1 mol/L Tris,pH 10.4。阴极缓冲液:0.1 mol/L 精氨酸,0.01% ( W/V)SDS,pH 10.5。SDS 的存在有利于

蛋白质印迹实验——从SDS凝胶上转移蛋白质

蛋白质印迹(protein blotting ) 也称为电泳转移(electropheretic transfer),即把从电泳或层析分离的蛋白转移到固定基质上的过程。固定基质通常是一些纸或膜。最通常的蛋白质印迹是将从聚丙烯酰胺凝胶电泳上分离的蛋白质分子转移到硝化纤维素膜上。本实验来源「蛋白质电泳实

蛋白质印迹法SDS-PAGE电泳的相关介绍

  1、清洗玻璃板  一只手扣紧玻璃板,另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲,再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。  2、灌胶与上样  (1)玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶(操作时要使两玻璃对齐,以免漏胶)。  (2) 按前面方法配10%分离胶,加入TEMED后立

western-blot跑不出条带,是什么原因

  转膜的问题,膜和胶之间有气泡等。  Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。  生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技

western-blot跑不出条带,是什么原因

  转膜的问题,膜和胶之间有气泡等。  Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。  生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技

western-blot跑不出条带,是什么原因

  转膜的问题,膜和胶之间有气泡等。  Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。  生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技

Westernblot法的起源和发展

生物大分子印迹法实际上是凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的综合性技术,其核心在于把凝胶电泳已分离的区带转移并印迹于固定化纸上。生物大分子印迹法始创于1975年,内苏格兰爱丁堡大学E.M.Southern首先提出。他将限制酶切后的DNA片段先进行琼脂糖凝胶电泳,把一张硝酸纤维素纸放在

印迹法的基本原理及应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA-RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把该方法

印迹法(blotting)基本原理和应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA- RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把

wb转膜条件公式

wb转膜条件公式:10% SDS溶液(m/v)。将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体(例如NC膜)上,通常有两种方法:毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同,只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。前者操作容易,转移效率高;而后者适用于大胶的蛋白

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

蛋白质印迹(Western-blotting)

印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年,Southern建立了将 DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法,对 RNA和蛋白