白细胞过滤对新鲜冰冻血浆凝血因子及血浆蛋白的影响

作者：杨江存1 于青 1 李芒会 2  董选玲 2 宋耀军 1 任健康 2
（1.陕西省人民医院输血科，2检验科，西安710068）

应用白细胞过滤器制备的少白细胞血液成分在预防发热性非溶血性输血反应（NHFR），HLA同种免疫反应及各种相关疾病的感染等方面已取得一定效果。有效白细胞滤除前后对全血及红细胞悬液性能、细胞形态及细胞免疫方面的影响研究已有报道，但对血浆制品滤除前后血浆蛋白及凝血因子的影响报道很少。由于血液凝血因子在机体凝血机制方面起着相当重要的作用，以及冰冻血浆所含不稳定凝血因子易失活等特性，本文通过观察白细胞过滤前后对血浆凝血因子和血浆蛋白的影响来证实白细胞过滤血浆的应用价值，现报道如下：
1 材料与方法
1.1实验仪器 SYSMEX CA-1500全自动血凝分析仪；HITACHI 7170A全自动生化分析仪。
1.2试剂 试剂均为DADE BEHRING 公司生产。标准血清（Lot.No.502578）；PT试剂（Lot.No.505627B）； APTT试剂（Lot.No.527158）； Fib试剂（Lot.No.537511）；TT试剂（Lot.No 515465）；Coagulation Factors Ⅶ（Lot.No.500780）；FⅧ （Lot.No. 503872B）；FⅨ（Lot.No.500881B）；Dade Thrombin Reagent 试剂（Lot.No.500560B） 
1.3研究对象：20份新鲜冰冻血浆来自陕西省血液中心，ACB-B抗凝全血分离制备而成。
1.4取样方法：随机分批抽取新鲜冰冻血浆（FFP）20人份，37℃水浴融化，融化后立即在超净工作室内按无菌技术要求抽取血浆2ml为过滤前组，随后对血浆进行过滤，并从过滤后的血浆中同样抽取2ml为滤除后组，对两组进行血浆凝血因子和血浆蛋白的测定。
1.5 凝血因子测定方法：严格按照SYSMEX CA-1500全自动血凝分析仪操作说明和试剂要求，采用凝结光学检测法原理，对不同的检测项目利用不同稀释度标准血浆凝结时间与相应的凝血因子活性率取对数后标绘于对数图上，绘制成标准曲线，然后测定受检者血浆凝结时间与相应因子活性率所获数据按内插法带入回归方程，计算受检者血浆中凝血因子活性水平。我们观察的指标为：PT、APTT、Fib、FⅦ、FⅧ、FⅨ等。血浆蛋白测定在HITACHI 7170A全自动生化分析仪上进行。
1.6 血浆白细胞滤除方法：在超净工作室按无菌要求对血浆进行白细胞过滤，操作按滤器说明并等同全血或悬液过滤方法。白细胞滤器采用北京博德桑特公司生产一次性白细胞过滤器。
1.7统计处理 采用成对资料T检验。
2 结果：新鲜冰冻血浆白细胞过滤前后血浆凝血因子及血浆蛋白的变化见附表：
新鲜冰冻血浆白细胞过滤前后血浆凝血因子及血浆蛋白的变化
PT(s) INR APTT(s) FIB(g/L) TT(s) 
滤前 13.32±0.64 1.109±0.05 35.26±22.63 2.204±0.57 16.45±1.64
滤后 13.86±0.64 1.155±0.05 83.31±27.63 2.333±0.57 18.29±1.64
t值 2.5730 2.8383 6.7138 1.2712 3.5452
p值 < 0.05 < 0.05 < 0.05 > 0.05 < 0.05
续表：新鲜冰冻血浆白细胞过滤前后血浆凝血因子及血浆蛋白的变化
FⅦ% FⅧ% FⅨ% TP(g/L) ALB(g/L)
滤前 94.08±5.74 148.32±47.44 103.3±13.85 58.96±3.67 38.09±1.72
滤后 97.9±5.74 123.02±42.18 86.32±14.47 59.46±2.50 38.90±2.10
t值 2.1029 3.570 2.885 0.652 0.587
p值 > 0.05 < 0.05 < 0.05 > 0.05 > 0.05

3 讨论
3.1研究表明，血液中非治疗性成分如白细胞是一种污染物，同种异体输注将会产生许多不良输血反应，如非溶血性发热性输血反应、HLA同种异体免疫反应、血小板输注无效等，同时还可引起嗜白细胞病毒传染病的感染[1、2、3]。白细胞滤除前后对全血及红细胞悬液性能、细胞形态及细胞免疫方面的影响研究已有报道[4、5]。而对血浆制品滤除前后血浆蛋白及凝血因子的影响研究报道很少，且栾建风[6]等证明新鲜冰冻血浆中确实残留有引起上述不良反应的残留白细胞，且经冻存3个月后还有一定数量的白细胞存活，故其认为，新鲜冰冻血浆进行白细胞过滤是很有必要的。
3.2 新鲜冰冻血浆（Fresh Frozen Plasma, FFP）是自血液采集后6-8h之内经分离放入-50℃速冻成块，然后在-30℃保存一年，其几乎含有全部凝血因子，包括不稳定因子FⅤ和FⅧ[7] 。然而，不稳定凝血因子如FⅧ在体外半衰期为8-12h,其活性易失活，并由于在离体后FⅧ接触异物表面，不同程度被激活，凝血酶和FⅩa也能在此继续裂解FⅧa,使之灭活[8]。白细胞过滤器去除白细胞的机理通常为：①阻滞作用；②表面张力；③电荷密度。但滤材孔径较凝血因子大的多，因此，血液过滤过程中阻滞作用可以不考虑；而滤材的表面张力和电荷密度在去除白细胞的同时，有可能对凝血因子和蛋白有一定的吸附作用。
3.3本资料凝血因子检测指标有：PT试验（凝血酶元时间），是用于快速、敏感检测外源性凝血途径（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅰ）凝血功能紊乱的筛选，INR是PT用国际标准化比值来表示；APTT试验（活化部分凝血活酶时间），是用于内源性凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）活性异常的筛选；TT试验（凝血酶时间），是用于快速评定止血和血栓形成的有效方法，可以定量监测功能性纤维蛋白原水平。
3.4本实验结果表明，新鲜冰冻血浆白细胞过滤前后，PT、INR、APTT、TT、FⅧ%、FⅨ%都有明显改变（P< 0.05）。白细胞过滤后，PT和APTT时间均延长，说明过滤对内外凝血因子活性都有影响，且从实验结果可知对APTT和FⅧ%影响最大，也可能对FⅧ的吸附的影响而导致APTT时间的改变。李小平[9]等通过对全血过滤观察对凝血因子的影响结果表明，APTT和PT也同样延长，实验结果一致。同时从我们的实验结果可知，过滤前后血浆FIB、FⅦ%、TP和ALB没有改变（P> 0.05）， 说明过滤对血浆蛋白含量无影响，对血浆纤维蛋白原凝血因子Ⅶ也无影响。文献[9]对全血过滤前后凝血因子FⅨ%活性无影响，而我们的实验结果有改变（P< 0.05）。我们的实验结果与文献[9]相比，过滤前后FⅧ%、FⅨ%活性明显高于李小平[9]等的实验数据，可能是库存全血中不稳定凝血因子活性丢失有关。
实验结果表明，新鲜冰冻血浆白细胞过滤可使部分凝血因子活性丢失，但其仍保持在正常治疗水平之上，可以满足临床治疗的需要。
参考资料
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[3].杨江存，袁育康，刘景田，等.紫外线照射库血后不同储存时期雪细胞免疫功能和细胞因子的变化.中国医学物理杂志，2001，18（4）:246-248
[4].李卉，刘景汉，祁广宏，等.去白细胞红细胞制备的质量控制.中国医师杂志，2002，15（1）：58-59
[5].何静，陈方祥，刘建忠，等.去白细胞前后库存SAGM红细胞C3b受体功能的测定. 第三军医大学学报，2003，25（4）:322-323
[6].栾建风，严京梅，雷千红，等.血浆中残余白细胞的潜在免疫作用.临床检验杂志，2003，21（2）：71-74.
[7]中华人民共和国卫生部文件卫医发[2000]184号.<<临床输血技术规范>>.
[8]李静旗，张丽，宫本兰.冷链对新鲜冰冻血浆FⅧ活性的影响[J]。临床输血与检验,2003,5(3):192-193
[9] 李小平，冯永生，段景斌，等.白细胞过滤器对血液凝血因子的影响.中国输血杂志，2003，16（6）：388