简易且能避免污染的细胞培养方法

培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱，且为保持箱内二氧化碳气5%～10%的浓度，需持续输入二氧化碳气体。为此，箱内的培养瓶盖不能拧紧以便二氧化碳气体自由进出。

*步，配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂，偏碱时液体为深红或紫色，偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基，加入750ml三蒸水或去离子水，摇匀(一般培养液呈橘红色)；再加入碳酸氢钠1～1．1g，至完全溶解(呈深红色)；zui后再加三蒸水或去离子水至1L止。

第二步，插吸管于配好的培养液内，通入二氧化碳气体。随着二氧化碳气的融人，液体逐渐变成黄色。用一次性0．22 m孔径的滤膜于正压情况下将该液体过滤除菌。在此过程中，由于部分二氧化碳气体溢出，液体渐成橘黄色。此时迅速将其分装到4个250ml的瓶内，一定塞严或拧紧瓶。在无菌情况下取样本数毫升，37。c无菌培养72h，确定该批培养液无污染后方可使用。常使用的培养液存放于4℃冰箱内，其它暂时不用的可放入一20。c冰箱内保存。

第三步，根据不同细胞系的需求添加不同量血清和抗生素。将配好的培养液吸入小培养瓶内，再将适量细胞吸入，塞严或拧紧瓶盖，置37。c普通隔水式恒温箱内即可。操作过程中因有少量二氧化碳气体溢出，液体呈橘红色，酸碱度(pH) 约为7．0～7．2。如果细胞较少或者生长较慢，液体的pH值似宜偏酸些为好。