哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏CD4+T细胞的分离（一）
哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏 CD4+T细胞的分离Establishment of sensitized asthma model in mice and CD4+T lymphocyte isolation from spleens 程晓明,王长征,李淑平,钱桂生(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所,重庆 400037) 提 要 : 目的 建立一种可靠的哮喘致敏小鼠模型及分离脾脏 CD4+T细胞。方法 采用卵蛋白致敏的方法建立模型 ,运用panning法分离 CD4+T细胞。结果 此模型小鼠肺组织呈现典型的哮喘样病理改变 ,其外周血、支气管肺泡灌洗液(BA......阅读全文
哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏CD4+T细胞的分离（一）
哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏 CD4+T细胞的分离Establishment of sensitized asthma model in mice and CD4+T lymphocyte isolation from spleens 程晓明,王长征,李淑平,钱桂生(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸
哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏CD4+T细胞的分离（二）
1.4.2 肺组织标本留取 打开未经支气管肺泡灌洗的各组各 6 只小鼠胸腔 ,观察肺脏的大体改变 ,剪取部分肺组织 ,经10 %甲醛固定后切片 ,行 HE染色。1.5 CD4+T细胞的分离及鉴定1.5.1 CD4+T细胞的分离 打开小鼠腹腔 ,无菌取出脾脏放入冷 Hanks液中 ,将其
从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞
实验步骤 基本方案 12.为 检 验 细 胞 纯 度 ，可 加 入 终 浓 度 为 lOug/ml 的 抗 C D 3- F I T C 和 P K 136-PE (抗N K 1. 1 ) 抗体，进 行 流 式 分 析（第四章）。 展
小鼠脾脏树突状细胞的分离方法
小鼠脾脏DC是研究最多的淋巴组织DC，其特征为组成性表达MHC-II类分子和CD11c。该细胞群可进一步分为三群：主要分布于边缘区的CD4+CD8-CD11b+DC，主要分布于T细胞区的CD4-CD8+CD11b-DC和双阴性DC----CD4-CD8+CD11b+。其中，CD8+DC表达CD1d和
小鼠CD4+T细胞外泌体分离及鉴定
目的：探讨CD4+T细胞是否具有分泌外泌体的能力，以及CD4+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤免疫过程的可能。 方法：应用断颈处死的方法取出小鼠的脾脏，用磁珠分选的方法从小鼠脾脏细胞中分选出CD4+T细胞，并尝试从培养基上清液中提取CD4+T细胞的外泌体，在透射电镜下观察，后用PCR技术分
小鼠CD4+T细胞外泌体分离及鉴定
目的：探讨CD4+T细胞是否具有分泌外泌体的能力，以及CD4+T细胞外泌体参与炎症及肿瘤免疫过程的可能。方法：应用断颈处死的方法取出小鼠的脾脏，用磁珠分选的方法从小鼠脾脏细胞中分选出CD4+T细胞，并尝试从培养基上清液中提取CD4+T细胞的外泌体，在透射电镜下观察，后用PCR技术分析miR-23a、
小鼠脑出血模型的建立
实验材料 小鼠试剂、试剂盒 戊巴比妥钠仪器、耗材 钻孔器注射器含抗凝血剂的试管鼠板缝合方针和线实验步骤 1．固定小鼠 a．用绳子将已麻醉的小鼠俯卧（背朝上）固定在鼠板上，绳子用活结，这样不易打滑。固定时要保持小鼠的两只前脚和两只后脚分别在一条直线上。 b．用棉花将小鼠的头微微垫高，这样方便切开皮肤。
小鼠脑出血模型的建立
实验材料小鼠试剂、试剂盒戊巴比妥钠仪器、耗材钻孔器注射器含抗凝血剂的试管鼠板缝合方针和线实验步骤1．固定小鼠 a．用绳子将已麻醉的小鼠俯卧（背朝上）固定在鼠板上，绳子用活结，这样不易打滑。固定时要保持小鼠的两只前脚和两只后脚分别在一条直线上。 b．用棉花将小鼠的头微微垫高，这样方便切开皮肤。 2．钻
哮喘大鼠模型的制作和T淋巴细胞的分离
大鼠哮喘模型的分组及建立实验大鼠分组：根据随机化原则，将24只雄性Wistar大鼠（体重190-250g） 按体重编号，采取随机排列表法分为以下4组：（1）正常对照组、（2）哮喘一周组（激发一周）、（3）哮喘两周组（激发二周）和（4）哮喘四周组（激发四周及以上）。哮喘模型的建立：第一天三组哮喘组大鼠
转基因小鼠模型的建立(SOP)4
（6） 为保暖包裹小鼠于纱布中或将其放置于热垫内使其苏醒，处于麻醉状态 下的小鼠应该严格监护直到其完全苏醒。手术后小鼠饲养2周后确定手术是否成功。 （7） 实验性饲养：将1-2只母鼠与输精管切除小鼠合笼饲养，次晨进行阴道栓检查。有阴道栓的母鼠，用磷酸缓冲液处理后24小时，其输卵管潮红。卵细胞
转基因小鼠模型的建立(SOP)6
[洗卵管制作] 1） 点燃酒精灯，调节火焰到最佳。捏持玻璃毛细吸管或巴氏移液管在火焰上焰旋转过火。 2） 当吸管开始变软，快速撤离火焰，向外急剧扯拉使吸管变长，形成口径大约200?l的吸管。注意制备过程中离开火焰的时间以及扯拉的力度，尽量保证制备吸管的一致性。 3） 为吸管评分，轻柔地
转基因小鼠模型的建立(SOP)3
（2）受体母鼠的准备输卵管转移的受体鼠应该为4-6周龄大小，体重在20-25克左右，严禁用低体重以及超重母鼠，若体重较低，其体能不足以维持妊娠，可能导致受精卵的重新吸收；若体重较重，麻醉剂被吸收入脂肪组织，降低麻醉效果，可能使手术困难，而且脂肪组织的存在意味着静脉的存在，所以手术时切掉脂肪组织可能导
转基因小鼠模型的建立(SOP)7
4） 如果未见DNA溶液流，则轻轻摩擦持样器钝缘，渐渐的打开注射器针头。针头重新进入油内确定DNA溶液流的存在。5） 移动持卵管回到受精卵下部。通过微分驱动水压控制系统使持卵管内产生温和的负压，并使持卵管末端吸住受精卵。此操作必须确保受精卵基底部与凹玻片基底部轻轻接触。注意不宜吸得过紧，否则会使
转基因小鼠模型的建立(SOP)7
10） 移卵操作完成后，撤回移卵管，去除器械，按原本位置将各器官重置于腹腔内。10）缝合切口，用小夹夹持皮肤。常用自动小夹代替缝线，这样可以避免小鼠啃嘶缝线，切口裂开。11）若进行双侧手术，则于另一侧子宫角重复上述操作。12）手术完成后，安置小鼠于清洁的笼中。麻醉状态下，小型哺乳动物无法有效维持机
转基因小鼠模型的建立(SOP)5
4．显微注射（1）导入DNA的制备：显微注射首先涉及导入DNA的制备，显微注射的转入基因通常为去除载体序列的线状DNA，转基因所用载体是真核表达载体，即含有在哺乳动物细胞内表达的真核启动子。所谓组织特异性的实现多是通过组织特异性启动子来实现组织特异性表达的。制备转基因小鼠，必须对待导入DNA进行分离
转基因小鼠模型的建立(SOP)2
[不足之处]（1）外源基因随机整合；（2）个别原核不清晰，需进行特殊处理；（3）需大型精密仪器，费用昂贵；（4）操作周期相对较长。（二）实验器材的准备1．输精管切除术用器材：弯式有齿镊、直式有齿镊、显微镊、手术剪、自动小夹涂药器、自动小夹、带弯针4/0丝线及持针器、直径为10cm塑料 Petri氏培
转基因小鼠模型的建立(SOP)1
名称：转基因小鼠模型的建立(SOP)关键词：转基因小鼠目的：在动物体研究转化基因原理：转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供
转基因小鼠模型的建立(SOP)8
（1） RNA的分离：根据实验者的需要从转基因小鼠组织或细胞中提取总RNA或mRNA。分离总RNA比较简单，且适合做基因做基因转录分析。实验操作参见第一章的第四节。（2） Northern 印迹分析：该技术用于定性检测转基因动物组织或细胞中转基因转录的相对水平。其实验操作参见第一章的第九节。（3
小鼠脾脏T细胞和人PBMCs的体外T细胞活化实验（一）
导言成熟T细胞通过TCR识别并与抗原-MHC复合物反应。TCR活化的最直接后果是信号通路的起始，这些信号通路包括诱导特异性蛋白酪氨酸激酶（PTKs）、PIP2分解、PKC活化以及细胞内钙离子浓度的升高。这些早期事件被传递到核，产生诸多效应：1、 T细胞克隆的扩增2、 细胞表面活化标志的上调3、 分化
昆明小鼠原位胃癌移植模型的建立实验
昆明小鼠原位胃癌移植模型的建立可以：（1）建立一个能真实模拟临床胃癌的理想动物模型；（2）深人研究胃癌的转移机制和寻找新的治疗方法；（3）为人胃癌转移机理与抗转移治疗提供一个有价值的工具。皮下移植块原位移植法实验方法原理采用两种不同的肿瘤细胞株分别在昆明小鼠胃部原位建立胃癌模型。造模后对原位移植瘤的
百奥赛图IL33人源化哮喘模型小鼠介绍
白细胞介素33（IL33）属于IL1细胞因子超家族的成员，在结构上IL33在其氨基端部分具有螺旋-角-螺旋结构，其中存在涉及染色质结合基序和核定位信号, 在羧基端部分是β-三叶结构域，可以与孤儿受体ST2结合[1]。IL33可由多种类型细胞表达，包括成纤维细胞，肥大细胞，树突细胞，巨噬细胞，成骨
人胰腺癌裸小鼠模型的建立实验
实验方法原理 将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE 染色。 实验材料 裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌细胞株8988 试剂、
人胰腺癌裸小鼠模型的建立实验
人胰腺癌裸小鼠模型的建立用于：（1）胰腺癌的诊断；（2）胰腺癌治疗的研究；（3）观察胰腺癌细胞株在移植前后形态学是否发生变化。实验方法原理将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞
人胰腺癌裸小鼠模型的建立实验
实验方法原理 将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE 染色。实验材料 裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌细胞株8988试剂、试剂盒 RPMI-1640 完全
IL33人源化哮喘模型小鼠介绍
白细胞介素33（IL33）属于IL1细胞因子超家族的成员，在结构上IL33在其氨基端部分具有螺旋-角-螺旋结构，其中存在涉及染色质结合基序和核定位信号, 在羧基端部分是β-三叶结构域，可以与孤儿受体ST2结合[1]。IL33可由多种类型细胞表达，包括成纤维细胞，肥大细胞，树突细胞，巨噬细胞，成骨细胞
腹部辐射致肠粘膜屏障损伤模型的建立
腹部受辐射(Abdominal Radiation，AR)致严重的肠粘膜屏障损伤，如放射性肠炎，在平、战时均可发生。辐射损伤作为肠道粘膜屏障损害的主要原因之一，可致增殖的隐窝细胞死亡，肠道细菌易位，粘膜溃疡、坏死、出血，肠梗阻，肠瘘，脓肿形成和腹膜炎，最终导致内源性败血症和多器官功能衰竭等致死性并发
支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立（一）
李斌恺 赖克方 洪燕华 王法霞 陈如冲 林少建 钟南山【摘要】 目的 目前国内对支气管哮喘 (简称哮喘) 小鼠的评价多数仅立足于气道炎性指标 ,不能完全反映哮喘的病理生理特征 。 本所率先从国外引进了小动物无创检测和有创检测肺功能仪 。 无创法检测时小鼠不必麻醉 ,而
小鼠巨噬细胞的分离
基 本 方 案 1 小鼠腹腔巨噬细胞的分离材料小鼠，洁 净 环 境 中 饲 养（最好置层流柜中饲养）7 3 % (m /V ) 豚 蛋 白 胨 或 者 3 % (W V r) Brewer 硫 基 乙 酸 盐 肉 汤（Brewerthioglycollate medium，分离炎性腹腔巨嗤细胞用）7
从鼠弓形虫抗原致敏的树突状细胞中分离的...
实验概要通过注射在体外用TAg致敏过的来自于DC细胞的外质体，在体内诱导了弓形虫属特异性Th1分子免疫应答并获得了抗弓形虫感染的保护效应。研究证实致敏的DC衍生外质体能够对鼠弓形虫感染和其它某些病原感染产生免疫保护。这种无细胞疫苗对于人类疫苗策略是一种很有吸引力的保护工具。实验材料动物：8-10周龄
显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程
实验概要本实验详细介绍了显微注射法建立转基因小鼠模型的操作流程。实验原理转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因(或基因组片段)用显微注射法注入供体小鼠的受精卵(或着床前胚胎细胞)，然后将此受精卵(或着床前胚胎细胞)再植入受体动物的输卵管(或子宫)中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，通过分