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蛋白质谱样品制备指南(一)

研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性,为解决蛋白研究的困境,应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表,常被用于几个蛋白研究的重要方向:蛋白基础功能探究(结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等),蛋白鉴定(定位、机理等),蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变,不仅因为机器技术门槛高,而且对于上机样品的质量要求极高。质谱仪性能的迭代更新为我们提供了更高的精度、更快的速度、更多的鉴定效率,而建立成熟完善的样品前处理方法才是最重要的环节。 依据蛋白样本的来源种类,质谱样品一般分为细胞、组织、体液(血清、血浆、脑脊液、尿液等)。 图1. 基于质谱的定量蛋白组工作流程 以下为大家整理了质谱上机前蛋白样品制备的几个核心环节和解决方案......阅读全文

第三届全国样品制备学术报告会 第三轮通知

  第三届全国样品制备学术报告会 第三轮通知  中国仪器仪表学会分析仪器分会样品制备专业委员会定于 2017年8月23–25日在云南省昆明市召开第三届全国样品制备学 术报告会。本届学术会议旨在促进样品制备技术及相关仪器装置 的学术交流与发展。 会议将邀请在样品制备领域取得重大进展的海内外科学

新材料层出不穷 第四届全国样品制备学术会分会报告

  2019年8月31日,第四届全国样品制备学术报告会在青岛银沙滩温德姆至尊酒店召开(相关报道:第4届全国样品制备学术会在青岛召开 关注新机遇新挑战)。大会报告(相关报道:简化制样、提高灵敏度 看第四届全国样品制备会大咖报告)后,会议还带来了精彩的分会场口头报告,各个专家、厂商纷纷带来样品制备方面的

质谱检测法如何进行蛋白质分析?

  MS/MS操作模式  串联质谱仪通常使用的都是离子模式来鉴定蛋白质的氨基酸序列。目前所有的MS/MS质谱仪都具有该功能。不过其它特殊的质谱仪也具有MS/MS功能。如果要发现蛋白质中的某个功能基团则需要用到母离子扫描功能或者中性丢失扫描功能,而这就必须用到三重四级杆质谱仪,如Q-Q-Q质谱仪,或四

检验科临床质谱实验室开展质谱检测的7大挑战

  临床实验室质谱(mass spectrometry, MS)技术在临床实验室中的应用随着MS分析仪的创新不断拓展。最早的MS分析仪采用扇形电场及磁场实现质量分离, 体积大、价格贵。随着四极杆MS分析仪与色谱分离、第1代气相色谱(gas chromatography, GC)及液相色谱(liqui

检验科开展质谱检测所面临的7大挑战

  美国纽约州罗彻斯特大学病理和检验系副主任, 临床质谱和毒理室主任和临床化学室副主任, 美国临床化学认证委员会认证的临床化学专家。  临床实验室质谱(mass spectrometry, MS)技术在临床实验室中的应用随着MS分析仪的创新不断拓展。最早的MS分析仪采用扇形电场及磁场实现质量分离,

周正洪组:冷冻电镜研究蛋白组比传统方法强在哪?

  自DNA重组技术和蛋白亲和纯化方法问世以来,研究人员利用蛋白异源表达纯化技术与X射线晶体衍射学方法解析了大量蛋白的高分辨结构,极大地丰富了我们对细胞中各种重要生命过程分子机制的认知【1】。然而这种方法需要大量高纯度蛋白样品,无法应用于异源系统表达量较低或或不易结晶的蛋白样品,比如大的蛋白复合物。

质谱仪

最近又有几项有关质谱仪的最新进展问世,这些新成果的出现又给我们的生物大分子研究工作补充了“弹药”。在蛋白质测序方面,基于碰撞诱导裂解技术(CID),又新出现了可变裂解技术(Alternate fragmentation technique),该新技术是基于处在碰撞池中的离子具有的电子传递特性开发出来

质谱检测法与蛋白质分析(二)

传统的和最新的蛋白质组学研究策略虽然到目前为止,还没有一种蛋白质组学研究策略能够对某个蛋白质组进行常规的、完整的分析,但是现在的技术已经非常强大,我们相信,很快就能进行全蛋白质组学研究了。而且,对某个亚蛋白质组(比如某个细胞器或亚细胞结构的蛋白质组)进行研究早就已经不是什么难题了,这已经成为了一种常

第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举办(上)

  分析测试百科网讯 2015年8月16日,中国仪器仪表学会分析仪器分会样品制备专业委员主办的第二届全国样品制备学术报告会在贵阳举行。本次大会与中国仪器仪表学会分析仪器分会2015学术年会同期举办,参会200余人。张玉奎院士担任会议名誉主席,关亚风研究员担任会

双向电泳的新进展和新工具

  随着蛋白质组学概念的提出,双向电泳(2D gel electrophoresis)一度曾变得很流行。近几年,因质谱技术的快速发展,LC-MS的热度似乎更高。然而,在某些应用上,双向电泳更有优势。   双向电泳提供了整个样品的鸟瞰图,而这是质谱无法比拟的。它可以对样品中复杂的蛋白质进行整体性

蛋白质组实验全套流程方案-1

 蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步,将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法,尽管处理方法多种多样,但都遵循几个基本的原则:1)尽可能的提高样品蛋白的溶解度,抽提最大量的总蛋白,减少蛋白质的损失;2)减少对蛋白质的人为修饰

优化质谱仪的使用

全球实验室正在通过将样品制备和液相分离的一步完成来简化实验室的分析方法。Thermo Scientific独特的TurboFlow在线基质样品萃取技术和多通路技术可以降低分析成本,提高样品分析通量,让分析工作者对LC-MS/MS分析结果更加自信。 TurboFlow技术是基于色谱原理的创新样品制

CPSA分会:LC-MS在生物分析中的应用

  2012年4月25~27日,第三届中国上海化学与药物结构分析会议 (CPSA Shanghai 2012)在上海浦东新区淳大万丽酒店召开,来自国际知名药企、跨国大制药公司、中国CRO、生物医药研究所和高校的高管、专家、学者百余人参加了本次会议。其中在4月25日的

《科学家》期刊:2018 top 10创新产品

随着大数据和全基因组测序的发展成熟和大量研究的广泛开展,有时不免让人觉得研究人员将他们的显微镜(microscope)更换为宏观镜(macroscope)。但是,《科学家》杂志举办的2018年十大创新竞赛讲述了一个不同的故事:单个细胞。在《科学家》杂志的独立评审团评选出的2018年十大创新产品中,它

质谱仪用于地震灾后不明成分危害物的分析检测

一)功能与用途地震是一种突发的自然灾害,震后生态环境和生活条件受到极大破坏,卫生基础设施损坏严重,供水设施遭到破坏,饮用水源会受到污染,是导致传染病发生的潜在因素。采用不同的样品制备技术,选择不同性能的分析仪器,实现对未知样品的定性分析,为危险物的处置提供依据。本技术可用于不明原因的突发事件原因分析

4位学者亲述:质谱技术分析蛋白相互作用

  质谱技术已经成为了蛋白质组学研究的主力。这种技术方法能精确的检测多肽,从而帮助研究人员识别并测序多肽分子,分析它们的特征,了解它们如何进行化学修饰的。  但大多数蛋白质并不是单独行动的,一些关键的生物学过程,如DNA 复制、转录、翻译、细胞分裂和能量生成都依赖于大型蛋白复合物的行为,这

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

实验步骤:3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作。因此,

相约下一届 第四届全国样品制备学术会圆满闭幕!

  分析测试百科网讯 2019年9月1日,第四届全国样品制备学术报告会在青岛圆满闭幕。在闭幕式前夕,中国科学院生态环境研究中心江桂斌院士、浙江大学化学系教授方群、四川大学分析仪器研究中心教授段忆翔、中国科学院烟台海岸带研究所研究员陈令新、中山大学化学学院教授欧阳钢锋和青岛理工大学教授马继平带来了精彩

蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类

蛋白质组,蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

2-DE 蛋白质组学的 PROTICdb 数据库实验

仪器、耗材DBMS实验步骤3.1 PROTICdb 概述在输入或浏览数据时,每个最终用户需要一个 PROTICdb 账户(由您的管理员创建 ) 。作为一个新用户,首先要创建一个新的项目。一旦建立,该项目就属于这个用户,这个用户有权授予其他用户访问权限。为确保数据一致性的精确度,尽量不要用手动输入操作

蛋白质组学几种定量方法的案例解读

   上期分享的蛋白组学内容,是不是有些小伙伴还绕在云里雾里呀?这次,小编用实例说话,帮您梳理清楚。   一、Label-free定量    Label-free定量,顾名思义就是不需要对比较样本做特定标记处理,只需要比较特定肽段/蛋白在不同样品间的色谱质谱响应信号便可得到样品间蛋白表达量的变化

2020CMSS完美收官!各领域百花齐放

  分析测试百科网讯 2020年9月18日,2020年中国质谱学会质谱网络研讨会(2020CMSS)进行到最后一天。今天由北京大学医学部精准医疗多组学研究中心的黄超兰教授、首都医科附属大学北京妇产医院检验科曹正副教授、北京师范大学生命科学学院高友鹤教授、中国科学院大连化学物理研究所刘心昱副研究员、中

第一届全国样品制备学术报告会大会报告二

  2013年8月3日-4日,由中国仪器仪表学会分析仪器分会样品制备专业委员主办,中国科学院大连化学物理研究所协办的“第一届全国样品制备学术报告会”在浪漫之都大连举行。会议期间来自全国100余位专家、学者及厂商代表共聚一堂,交流、切磋样品前处理技术的科研进展。分析测试百科网作为受邀媒体对大会进行了全

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

双向电泳实验——IPG-DALT 方法

试剂、试剂盒尿素去污剂还原剂载体两性电解质仪器、耗材IPG 凝胶实验步骤一、第一向1. 固相 pH 梯度凝胶或凝胶条的准备固相 pH 梯度凝胶的灌注及聚合方法请参阅 固相 pH 梯度等电聚焦 有关章节,如需要可切成 3~5 mm 宽的胶条在 -20℃ 保存一年。为避免繁琐和复杂的灌胶和切胶条程序和保

新型蛋白质结构分析手段-氢氘交换质谱技术进展

  氢氘交换质谱法是一种研究蛋白质空间构象的质谱技术。它在蛋白质结构及动态变化研究、蛋白质相互作用位点发现、蛋白表位及活性位点鉴定方面有着广泛的应用。随着氢氘交换质谱技术的不断发展,它正在成为结构生物学家及生物药物研发的重要手段。   氢氘交换质谱(HDX MS,hydrogen deuteriu

安捷伦:用创新的产品应用和流程解决客户痛点

  分析测试百科网讯 2018年ASMS在加州圣地亚哥举办,同在加州位于硅谷中心的安捷伦科技,本次ASMS带来的主题是:Innovation with purpose (有的放矢,创新超越)。会场上,分析测试百科网采访了安捷伦副总裁兼质谱事业部总经理Monty Benefiel先生和安捷伦全球公关总

蛋白质组学研究系列仪器及软件

人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具,最好的实验