蛋白质谱样品制备指南(一)
研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性,为解决蛋白研究的困境,应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表,常被用于几个蛋白研究的重要方向:蛋白基础功能探究(结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等),蛋白鉴定(定位、机理等),蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变,不仅因为机器技术门槛高,而且对于上机样品的质量要求极高。质谱仪性能的迭代更新为我们提供了更高的精度、更快的速度、更多的鉴定效率,而建立成熟完善的样品前处理方法才是最重要的环节。 依据蛋白样本的来源种类,质谱样品一般分为细胞、组织、体液(血清、血浆、脑脊液、尿液等)。 图1. 基于质谱的定量蛋白组工作流程 以下为大家整理了质谱上机前蛋白样品制备的几个核心环节和解决方案......阅读全文
蛋白质谱样品制备指南(一)
研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性,为解决蛋白研究的困境,应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表,常被用于几个蛋白研究的重要方向:蛋白基础功能探究(结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等),蛋白鉴定(定位、机理等),蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变
蛋白质谱样品制备指南(二)
1 蛋白提取 1. 细胞或组织样品裂解细胞裂解及高效地蛋白提取对于高质量的蛋白纯化至关重要。以下提供针对细菌、哺乳动物、酵母和植物细胞的裂解方案,以取得较之传统物理裂解法更高的蛋白得率,甚至可从细胞样品中选择性提取目的蛋白及总蛋白的、亚组分蛋白,以及线粒体、叶绿体、细胞核、高尔基体及溶酶体等重要的细
默克蛋白质谱样品制备超全指南(二)
2. 体液样本预处理体液样本在biomarker的发现中有重要意义,虽然目前还没有通过质谱筛选或鉴定的方法发现的biomarker,但科学家们正在尝试改良低丰度蛋白的富集和鉴定效率。这就需要我们能高效地去除体液样本中的高丰度蛋白,如Albumin,IgG,transferrin等。相比市面上只能去除
默克蛋白质谱样品制备超全指南(一)
研究过蛋白的人都能深刻体会其复杂性和多功能性,为解决蛋白研究的困境,应运而生了一系列技术、方法、仪器等。质谱技术就是其中一个典型代表,常被用于几个蛋白研究的重要方向:蛋白基础功能探究(结构、相互作用核酸/蛋白/蛋白组、修饰功能等),蛋白鉴定(定位、机理等),蛋白定量等。 很多初入门者一般谈“谱”色变
样品制备中的质谱技术
近几年来,质谱技术已在临床诊断领域中得到了广泛的应用。但其繁琐的样品前处理过程并没有明显改进。手工操作的局限性使得样品前处理已经成为质谱分析的主要瓶颈。但相比免疫测定技术,质谱分析无论是在自动化方面还是小分子检测中,都有着明显的优势。 许多临床诊断实验室中,标准检测方法常常是基于免疫分析
蛋白质组样品制备程序1
一、样品制备试剂的准备二、细菌细胞样品的裂解处理步骤三、人培养细胞样品的裂解处理步骤四、膜蛋白裂解方法步骤一、样品制备试剂的准备1、裂解缓冲液储备液的准备下述本样品制备方法已经过优化, 并被证明配合使用PF-2D 试剂盒可获得最佳的结果。您若选择其他的样品处理和细胞裂解方法,请务必避免使用离子型的表
蛋白质组样品制备程序2
2)在4℃条件下以20000g的离心力冷冻离心60分钟 (离心力务必达到或大于20000g)。3)移取上清溶液。若上清样品不立即使用,则须储存于-80℃(最佳条件)或-20℃的无霜冰箱中以防止蛋白质的降解。2、用初始缓冲液(Start buffer)交换处理细胞裂解液1)在上述细胞裂解液中,加入初始
蛋白质组学的样品制备
想要研究蛋白质,首先要得到高度纯化且具有生物活性的目的物质,因此,蛋白样品的制备是重要前提。蛋白提取的质量和效果对后续的研究分析有重要影响。不同种类的样本在制备过程中,存在一些差异,要根据样本特征调整实验方案和操作细节。基本原则样品处理尽量简单,减少蛋白损失;尽量避免蛋白的降解;尽可能提高样品蛋白的
SDSPAGE-蛋白质样品的制备
试剂、试剂盒 SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8) 10%SDS10%过硫酸铵TEMEDTris-甘氨酸电泳缓冲液溴酚蓝考马斯亮蓝 R-250 染色液考马斯亮蓝脱色液仪器、耗材 离心机冷室水浴锅电泳装置微量移液器水平摇床滤纸实验
SDSPAGE-蛋白质样品的制备
SDS-PAGE 蛋白质样品的制备 试剂、试剂盒 SDS-PAGE Loading Buffer ddH2O
试述蛋白质样品制备技术的原则
1.避免冷冻干燥尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体,但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了,准备点晶体之前,要用水或者缓冲液透析,除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。2.避免硫酸铵沉淀避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩蛋白。因为硫酸铵很难
蛋白质印迹法的样品制备
1、单层贴壁细胞总蛋白的提取: (1)倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)。 (2)每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放轻轻摇动1min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复以上操作两
SDSPAGE-蛋白质样品的制备
试剂、试剂盒SDS-PAGE Loading BufferddH2O30%丙烯酰胺混合液1.5M Tris(pH8.8)10%SDS10%过硫酸铵TEMEDTris-甘氨酸电泳缓冲液溴酚蓝考马斯亮蓝 R-250 染色液考马斯亮蓝脱色液仪器、耗材离心机冷室水浴锅电泳装置微量移液器水平摇床滤纸实验步骤实
XPS能谱仪样品的制备和处理
XPS能谱仪对分析的样品有特殊的要求,所以待分析样品需要根据情况进行一定的预处理。由于在实验过程中样品必须通过传递杆,穿过超高真空隔离阀,送进样品分析室。因此对样品的尺寸有一定的大小规范,以利真空进样。通常固体薄膜或块状样品要求切割成面积大小为0.5cm×0.8cm大小,厚度小于4mm。为了不影响真
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤取 20 mg 异硫氰酸荧光素,加 20 ml 无水乙醇,使 FITC 充分溶解,即为染色液的原液,保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下:1. FITC 贮存液的稀释:用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓度的工作液,备用。2. 被染色细胞首先用 70% 酒精破
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素,加 20 ml 无水乙醇,使 FITC 充分溶解,即为染色液的原液,保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下:1. FITC 贮存液的稀释:用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素,加 20 ml 无水乙醇,使 FITC 充分溶解,即为染色液的原液,保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下:1. FITC 贮存液的稀释:用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 ug/ml 浓
细胞蛋白质总量样品的制备及分析
实验步骤 取 20 mg 异硫氰酸荧光素,加 20 ml 无水乙醇,使 FITC 充分溶解,即为染色液的原液,保存于 4℃ 冰箱待用。具体荧光染色步骤如下:1. FITC 贮存液的稀释:用 pH 7.4 的 PBS 液稀释成 50 μg/ml 浓度的工作液,备用。2. 被染色细胞首先用 70% 酒精
核磁共振谱仪样品制备步骤以及方法
一、核磁共振谱仪样品制备步骤以及方法样品的请求 1)样品纯度普通应>95% ,无铁屑、灰尘、滤纸毛等杂质。普通有机物须提供的样品量:1H谱>5mg,13C谱>15mg ,对聚合物所需的样品量应恰当增加。 2)普通请求,样品在某种氘代溶剂中有良好的溶解性能,送样者应提供样品的溶解度。常
蛋白质样品的制备实验报告怎么写
蛋白质样品的制备实验报告应包括以下内容:1. 实验目的:明确本次实验的目的,例如提取蛋白质样品,纯化目标蛋白等。2. 实验原理:简要介绍所用方法的原理,例如SDS-PAGE,western blot等。3. 实验步骤:详细描述实验过程中所采用的步骤和操作方法,例如细胞裂解,离心,电泳等。4. 实验结
蛋白质样品的制备要注意哪些事项
1. 避免冷冻干燥 尽管有一些蛋白是经冷冻干燥处理后长出了晶体,但是大多数情况下并非如此。所以要尽可能避免冷冻干燥。如果蛋白已经这样了,准备点晶体之前,要用水或者缓冲液透析,除掉非挥发性的试剂和其他化学物质。 2. 避免硫酸铵沉淀 避免硫酸铵沉淀法作为纯化的最后一步或使用硫酸铵沉淀法来浓缩
X射线光电子能谱仪和样品制备
XPS仪由X射线激发源、样品台、电子能量分析器、检测器系统、超高真空系统等部分组成。X射线源:在目前的商品仪器中,一般采用Al/Mg双阳极X射线源。常用的激发源有Mg Ka X射线,光子能量为1253.6 eV和Al Ka X射线,光子能量为1486.6 eV。电子能量分析器:电子能量分析器是XPS
Covaris参加ASMS-2024,展示最新蛋白质样品制备技术
作为DNA片段化领域的行业领导者,Covaris将在ASMS 2024展示其前沿技术和解决方案。本次会议将于2024年6月4日至6日在美国举行,Covaris将在展位#234为与会者提供丰富的互动和学习机会。创新技术亮相ASMS 2024Covaris以其自适应聚焦声波(AFA®)技术而闻名,该技术
TEM样品制备
由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。 试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。 制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。
样品制备技术
俄歇电子能谱仪对分析样品有特定的要求,在通常情况下只能分析固体导电样品。经过特殊处理,绝缘体固体也可以进行分析。粉体样品原则上不能进行俄歇电子能谱分析,但经特殊制样处理也可以进行分析。由于涉及到样品在真空中的传递和放置,所以待分析样品一般都需要经过一定的预处理。
TEM样品制备
样品制备由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。l 试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。l 制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。 ▽ 超细颗粒制备方法示意图来源:公开资料 ▽ 材料薄膜制备
TEM样品制备
样品制备由于透射电子显微镜收集透射过样品的电子束的信息,因而样品必须要足够薄,使电子束透过。l 试样分类:复型样品,超显微颗粒样品,材料薄膜样品等。l 制样设备:真空镀膜仪,超声清洗仪,切片机,磨片机,电解双喷仪,离子薄化仪,超薄切片机等。▽超细颗粒制备方法示意图来源:公开资料▽材料薄膜制备过程示意
样品的制备
6 分析步骤6.1样品的制备测定前,应保证实验室样品至少在室温(20℃~25℃)下保持48h,以便使影响不溶度指数的因素,在各个样品中趋于一致。然后反复振荡和反转样品容器,混合实验室样品。如果容器太满,则将全部样品移入清洁、干燥、密闭、不透明的大容器中,如上所述彻底混合。对于速溶乳粉,应小心地混合,
GPC样品制备
样品制备 对于比较样品的好坏或者控制产品质量来说,GPC分析结果的重复性非常重要。那么从样品制备方面如何保证结果的重复性呢?一般来说,大家会认为自动进样器只是提高了分析的自动化程度,更加方便。实际上自动进样器更深层次的意义在于可以提高测试结果的重复性。传统的样品制备需要外部溶样和外部过滤,人为因
样品制备方式
(1)无机材料溶剂清洗或长时间抽真空,以除去试样表面的污染物。如对陶瓷或金属样,用乙醇或丙酮擦洗,然后用蒸馏水洗掉溶剂,吹干或烘干。用氩离子刻蚀法除去表面污染物。擦磨、刮剥和研磨。表层与内表面的成分相同的固体样品,用SiC纸擦磨或用刀片刮剥;粉末样品采用研磨的办法使之裸露出新的表面层。真空加热法。对