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半干电转印法

实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至滤膜上,就像在凝胶中迁移一样,只不过此处蛋白质的移动方向与胶平面垂直。该法转印速度快,均匀,亦不需较大的功率。在最早的文献中,阴极和阳极使用的是不同的缓冲液,但使用稀释的Tris/GlycineSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液系统较为简便。只需在阴极和阳极两边放入若干层预湿的玻璃纤维滤纸即可保持电极、凝胶和滤纸之间的良好接触。主要试剂硝酸纤维素滤膜蒸馏水或去离子水考马斯亮蓝染色液转印缓冲液(0.04%SDS,20%甲醇溶于48mmol/LTRIS,39mol/L甘氨酸)吸水纸(Whtaman 3 MM或替代物)主要设备半干转印装置实验......阅读全文

浸入式电转印

实验概要采用浸入法将蛋白质从凝胶转移至硝酸纤维素膜是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维素膜,然后再将这种夹层组合浸入盛有大量缓冲液的转印槽内,使电流从转印槽的一侧通向另一侧。通过电洗脱的方法可将蛋白质从凝胶中转印至滤膜上,如同在凝胶中迁移,只不过移动方向与胶平面垂直。若操作仔细,这是一种可将许多蛋白质转印至

半干电转印法

先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗

半干电转印法

实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至

Southern 印迹实验——电转印法

实验方法原理因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小,DNA不能在其横截面上有效地扩散,毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此,聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE仪器、耗材Scotch-Brite垫Whatman滤纸实验步骤1.  在非变性

Southern 转印分析

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

半干转印与湿式转印的区别 | WEALTEC 威泰克

刚接触 Western Blot 不久的用户,在选购 WB 设备时,经常会遇到仪器选型的问题:为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择,干式和湿式,那么哪种方法更适合我们呢?这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。

Southern 转印分析方法步骤

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

Western blot转印的优化

从SDS凝胶中进行Western蛋白转印的优化需要对一系列参数进行考虑。目的是转印所有凝胶上的蛋白并将其定量地转移到转印膜上。进行高效转印需要一定程度的优化,尤其是对于大分子量和小分子量蛋白。转印后,凝胶上应不残留或残留很少的蛋白。可以在转印后进行染色进行检测。转移出凝胶的蛋白应该仅在接触凝胶的膜的

蛋白质转印法

蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经尿素洗去SDS,并使蛋白质回復原态抗原性,可使用抗体进行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Transphor TE 52):转印

湿式转印槽使用教程

湿式转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为电泳系统的一个组件,小型转印槽能容纳2个凝胶三明治转印夹, 用于在电泳槽内电转印两块小凝胶。