Southern转印分析方法步骤

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)药品试剂:10×SSC (1.5 M NaCl; 0.15 M sodium citrate) 或20×SSC变性溶液 (1.5 M NaCl; 0.5 N NaOH)中和溶液 (1 M Tris-Cl; 1.5 M NaCl, pH 7.5)Nylon membrane 尼龙膜40 Methods in Biotechnology Vol 1Whatman 3MM 滤纸吸水纸方法步骤:1) 电泳的洋菜胶片,浸于0.25 N HCl 中15 min (当DNA 分子量不大时,可省去此步骤);以无菌水润洗胶片后,将胶片置于变性溶液中,于......阅读全文

Southern-转印分析

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

浸入式电转印

实验概要采用浸入法将蛋白质从凝胶转移至硝酸纤维素膜是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维素膜,然后再将这种夹层组合浸入盛有大量缓冲液的转印槽内,使电流从转印槽的一侧通向另一侧。通过电洗脱的方法可将蛋白质从凝胶中转印至滤膜上,如同在凝胶中迁移,只不过移动方向与胶平面垂直。若操作仔细,这是一种可将许多蛋白质转印至

半干转印与湿式转印的区别-|-WEALTEC-威泰克

刚接触 Western Blot 不久的用户,在选购 WB 设备时,经常会遇到仪器选型的问题:为什么常见的蛋白质电泳的转膜有两种方式可以选择,干式和湿式,那么哪种方法更适合我们呢?这里我们结合美国 WEALTEC 公司的 E-Blotter 湿转槽和 YRDIMES 快速半干转印槽举例说明。

Western-blot转印的优化

从SDS凝胶中进行Western蛋白转印的优化需要对一系列参数进行考虑。目的是转印所有凝胶上的蛋白并将其定量地转移到转印膜上。进行高效转印需要一定程度的优化,尤其是对于大分子量和小分子量蛋白。转印后,凝胶上应不残留或残留很少的蛋白。可以在转印后进行染色进行检测。转移出凝胶的蛋白应该仅在接触凝胶的膜的

Southern-转印分析方法步骤

在胶体中的DNA 可利用毛细现象的作用将DNA 牵引转印至覆盖在胶片上的滤膜,经烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以进行探针的杂合(hybridization) 反应。仪器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海绵;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)

半干电转印法

先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗

蛋白质转印法

蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经尿素洗去SDS,并使蛋白质回復原态抗原性,可使用抗体进行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Transphor TE 52):转印

半干电转印法

实验概要本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜,然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间,采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜,但使用100次后必须更换)制成的,也可以是铂金的(这种子板价格较贵,但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至

湿式转印槽使用教程

湿式转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为电泳系统的一个组件,小型转印槽能容纳2个凝胶三明治转印夹, 用于在电泳槽内电转印两块小凝胶。

Southern-印迹实验——电转印法

实验方法原理因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小,DNA不能在其横截面上有效地扩散,毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此,聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE仪器、耗材Scotch-Brite垫Whatman滤纸实验步骤1.  在非变性

转印槽使用方法步骤

伯乐bio-rad转印槽可快速、高质量地转印小型凝胶。作为Mini-PROTEAN 3 电泳系统的一个组件,伯乐bio-rad转印槽能容纳2 个凝胶支架转印夹,用于在Mini-PROTEAN 3 电泳槽内电转印两种小凝胶(Mini-PROTEAN 3 凝胶和ReadyGel 预制胶)。伯乐b

电泳和Western转印的常见问题

表1 Common problems for electrophoresis and western bloting问 题可能原因建议解决方法推荐电压条件下电泳时间过长。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。推荐电压条件下电流过高,热量过大。电泳缓冲液过稀。配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液。

半干转印系统操作使用说明

一.简介美国Bio-Rad公司的Trans-Blot SD型半干转印系统是在电场的作用下把聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶上的蛋白或核酸条带转移到硝酸纤维素膜上,其运用了电泳检测的方法,使得蛋白或核酸从凝胶中进行分离转移到硝酸纤维素膜上,由于硝酸纤维素膜的可支撑性,使得蛋白或核酸条带能够在电泳后继续做

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

蛋白质转印法检定蛋白质

蛋白质转印法检定蛋白质     蛋白质经SDS-PAGE后,胶片浸入转印缓冲液,蛋白质可被转印到硝化纤维纸(nitrocellulose) 上,先经?素洗去SDS,并使蛋白质回?原态抗原性,可使用抗体进?免疫染色 (Towbin et al, 1979)。仪器用具:电泳转印槽 (Hoefer Tra

四步轻松解决转印带来的麻烦

在之前的一篇文章中,我谈到了弯曲条带,这是一个常见由于凝胶铸造和跑胶所引起的问题。 然而,虽然转印似乎是一个更简单的过程,但也很容易出错。 下面我将介绍几个有用的建议,让您无时无刻地检测到您的蛋白。没有条带,意味着什么?不幸的是,第一次你可能会认为你的转印没有起作用,当你在在暗室里成像时,没有条带(

通过四步轻松解决转印带来的麻烦

  在之前的一篇文章中,我谈到了弯曲条带,这是一个常见由于凝胶铸造和跑胶所引起的问题。 然而,虽然转印似乎是一个更简单的过程,但也很容易出错。 下面我将介绍几个有用的建议,让您无时无刻地检测到您的蛋白。   没有条带,意味着什么?   不幸的是,第一次你可能会认为你的转印没有起作用,当你在在暗室

Northern-Blotting转印实验(毛细管转移法)

要进行Northern杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、

大分子量蛋白转印的5个技巧

做western blot印迹膜时,较大的蛋白质众所周知是难以处理的。 特别是,您可能很难实现良好的转印效率。 在某些方面,蛋白质难以朝着你想要的方向前进。我们将给5点建议,帮助胶上大分子量蛋白的转印。01牺牲胶的韧性来提高效率低浓度的丙烯酰胺凝胶可能难以操作。一旦手指触摸它就会撕裂? 但是,与

大分子量蛋白转印的5个技巧

做western blot印迹膜时,较大的蛋白质众所周知是难以处理的。 特别是,您可能很难实现良好的转印效率。 在某些方面,蛋白质难以朝着你想要的方向前进。 我们将给5点建议,帮助胶上大分子量蛋白的转印。 01 牺牲胶的韧性来提高效率 低浓度的丙烯酰胺凝胶可能难以操作。一旦手指触摸它就会

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)一、两块胶电泳和四块胶电泳Mini P-4小型垂直电泳槽 

电泳仪电泳槽半干转印电泳槽

  电泳仪,半干转(半干转印电泳槽)  一、两块胶电泳和四块胶电泳  Mini P-4小型垂直电泳槽

以毛细管转移方式进行Northern-Blotting转印实验

要进行北方杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (vac

一文读懂蛋白质转印原理-大分子量蛋白转印有哪些技巧

  通过凝胶电泳分离蛋白后,蛋白质被转移到固体膜载体上进行后续步骤。有效的转印依赖于膜的选择、所使用的转印设备的类型以及转印缓冲液的组成。  转印条件  蛋白的有效转印依赖于蛋白质从凝胶中迁移出来,也依赖于蛋白在膜上的滞留。像凝胶电泳一样,转印步骤将带负电荷的蛋白转印到带正电荷的电极上。转印效率受所

全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用

由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐,要求精度较高,实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵,所以采用仪器操作可以降低实验的风险,保证实验的顺利进行。 鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择,它配有自动移液系统,温控系统和孵育摇床。自动移液系统包括10个管

以毛细管转移方式进行北方转印实验

   要进行北方杂合反应前,必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸(nitrocellulose membrane) 或尼龙膜 (nylon membrane) 上,这一个过程称为转印 (blotting)。 一般常用的方法包括毛细管转移法 (capillary transfer)、真空转移法 (

免疫印迹与免疫检测实验——转移槽转印蛋白质

实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液仪器、耗材摇床海绵纤维素膜尼龙膜电转仪实验步骤1.  制备抗原样品,并用小型或标准尺寸的单向或双向凝胶分离蛋白,在一个或多个泳道中分离预染色或生物素酰化的蛋白质分子量标准。2.  电泳完成后,拆卸凝胶夹层,去除积层胶。以适量的转移缓冲液室温平衡凝胶30 min。3

邦纳激光读码器在烟箱转印条码读取中的应用

 在卷烟厂装封箱过程中,由于入库及出库的因素,需要在装箱的时候,进行检测分类,利用激光读码器可以快速,准确的在流水线上对不同类型的包装箱的条码信息进行读取,并将采集的信号传递到PLC系统进行分类。邦纳公司的TCNM-SP条码阅读器在烟箱分类检测系统上提供了完全解决方案。 TCNM-SP激光读码器系统

杂交膜转印膜*纤维素膜NC膜与PVDF膜的区别

1. *纤维素膜*纤维素膜是蛋白印迹广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以

鼎昊源全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用

  由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐,要求精度较高,实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵,所以采用仪器操作可以降低实验的风险,保证实验的顺利进行。   鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择,它配有自动移液系统,温控系统和孵育摇床。自动移液系