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定量westernblot实验为什么需要用验证抗体?

验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗体与抗原的亲和性高度依赖于实验条件,因此,验证您的试验方法中的条件适用于抗体与抗原的结合是十分重要的。在《JBC》杂志中关于抗体验证信息如下:定义所有使用的抗体的来源和种类,包括目录/批号。描述如何产生新抗体,包括表位/抗原的制备和纯化。描述支持抗体特异性的数据,包括翻译后修饰或新表位。证明对抗原进行遗传或其他分子修饰后免疫反应性降低。定量western blot尤其适用于确认获得的信号仅来自感兴趣的蛋白。如果没有进行抗体验证(并且验证荧光信号与蛋白质的量呈线性关系),将无法获得下游定量分析所需的准确度和精确度。为确保实验质量,国际抗体......阅读全文

Nature: 抗体正在误导科学界

  1994年到2011年间,《比较神经学》(Comparative Neurology)期刊的主编Clifford Saper经常看到一大堆利用抗体标记神经递质及其受体位置的论文。2000年前后,基因敲除小鼠在生物领域大受欢迎,但结果令人不安。这提醒了Clifford Saper一个事实:抗体正在

定量western blot实验为什么需要用验证抗体

   验证抗体对于WB结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而

定量western blot实验为什么需要用验证抗体

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定量western blot疑问解答—为什么需要验证抗体?

验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗体与抗

定量western blot疑问解答:为什么需要验证抗体?

验证抗体对于结果的一致性和重复性是至关重要的,即确认抗体能特异性识别感兴趣的蛋白,抗体与其他蛋白的交叉反应性情况。在您的论文提交给期刊发表之前,经常需要验证抗体的特异性,但并非所有人都花时间进行验证。或者很多人都认为他们使用抗体进行了免疫共沉淀验证,因而不需要再通过蛋白质印迹进行验证。然而,抗体与抗

实验室准则:抗体质量的金标

  几乎所有实验室都会用到抗体,抗体不仅是生命科学研究的重要工具,在免疫学诊断领域也是不可或缺的。市面上的抗体种类繁多同时也良莠不齐,由于缺乏评估抗体质量的标准方法,人们过去只能依赖于生产厂家的信用。   做过免疫荧光、免疫沉淀(IP)或者Western blot实验的人都知道,抗体优劣对实验结果有

如何挑选择适合自己实验的ELISA试剂盒?

elisa试剂盒在实验室已经相当普及,绝大多数ELISA试剂盒都是用于检测未知样本中抗原的浓度。用试剂盒当然比自己慢慢摸条件快得多,ELISA试剂盒不仅可以让实验更便利,往往还更加。现在市面上的ELISA试剂盒既有国产也有进口,数量繁多令人目不暇接,怎样才能选出zui适用的产品呢?一起来听听上海恒远

上样质控和抗体验证用于Western blot定量

今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR(R)和流式细胞术(R)精通,特别关心如何以及为什么使用某些上样质控,还有其它的技术被使用验证,蛋白质表达和抗体特异性的变化。 样品准备和上样质控 理想地,上样质控是多步骤过程的

上样质控和抗体验证用于Western blot定量

今天的帖子的灵感来自于我和同事在教他们SDS-PAGE和western blot的实验交谈中。 他们对于qRT-PCR(R)和流式细胞术(R)精通,特别关心如何以及为什么使用某些上样质控,还有其它的技术被使用验证,蛋白质表达和抗体特异性的变化。样品准备和上样质控理想地,上样质控是多步骤过程的一部分,

满足这个4个条件才算成功完成Western Blot检测

  成功完成一项Western Blot检测,必须满足4个条件:   凝胶洗脱:转移期间蛋白质必须从凝胶中洗脱出来,如果蛋白质还截留在凝胶中,将无法在膜上进行分析。   吸附到膜上:在转移过程中蛋白质必须吸附到膜上,如果蛋白不吸附,将无法在膜上进行分析。   处理期间仍截留在膜上:在转移后的处

如何用Western blot法验证PCR结果?

往期我们已经为大家详细介绍了利用CRISPR/Cas9构建编辑小鼠和细胞系的全部过程,相信大家在了解从sgRNA设计、表达载体构建至显微注射、小鼠鉴定等一系列过程的同时,常会为这样的难题所困扰:历经3-6个月得到的基因敲除的小鼠/细胞,PCR鉴定的结果居然和WB蛋白结果不一致?竟开始怀疑自己这几个月

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

美《科学家》杂志评选出2016年生命科学领域十大创新产品

  美国著名科普杂志《科学家》(The Scientist)是一份在生命科学方面被广大读者认可,并受业界尊敬的月刊杂志。该杂志一直致力于研究生命科学,为科研人员提供最新的研究动态,科研成果发布等多方面的报道。每年年底,该杂志都会颁发生命科学相关的十大创新产品奖项。  近日,《科学家》公布了其评选的2

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

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MIDASTM确证Biomarker(一)

生物标志物的发现是一个复杂而漫长的过程,AB公司结合QTRAP系列质谱系统的独特功能与扫描模式,创造性地开发出MIDASTM(MRM Initiated Detection And Sequencing)工作流程,满足了生物标志物验证与确认的4S要点,可以准确、快速、简便地完成大样本量