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WesternBlot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤 一、蛋白质印迹法 蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中,蛋白质样本首先通过 SDS-PAGE 进行分离,然后电转移到膜上。在用不相关的蛋白质封闭膜之后 ,用与靶抗原结合的一抗 (多克隆抗体或单克隆抗体) 与膜孵育。接着清洗膜,再用可与一抗发生反应的酶联二抗孵育。然后再次清洗膜,将其在合适的酶底物中孵育。如果使用比色底物的话, 信号可以目测,如果用化学发光和荧光底物,则 可 利 用 X 射线胶片或成像设备测得信号。 蛋白质印迹方法学中几个最重要的进步包括高灵敏度增强化学发光底物、成像系统和最近出现的多......阅读全文

印迹法的基本原理及应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA-RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把该方法

印迹法(blotting)基本原理和应用

印迹法(blotting)即转移电泳,是20世纪70年代发展起来的一种新方法。Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA- RNA杂交法,称作Southern印迹法。1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面,称作Nouthern印迹法。1979年Towbin等则把

蛋白质印迹(Western blotting)

印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年,Southern建立了将 DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上,并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法,称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法,对 RNA和蛋白

Western blotting蛋白印迹市场概况和主要品牌及产品

近日,MarketsandMarkets咨询公司发布了全球western blotting市场的分析报告。据MarketsandMarkets预测,全球western blotting的市场规模将从2016年的5.75亿美元增长到2021年的7.31亿美元,复合年均增长率达4.9%。另一家Futur

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B

Western bloting 综述

摘要:本文主要是针对Western bloting的原理及操作进行了简单的阐述,Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应,先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来,然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体(NC膜)上,然后再加抗体形成抗原抗体复合物,利用发光或显色原理将结果显示到膜或底片

第十五届离子色谱学术会盛大召开 聚焦新技术新应用

  2014年9月20日第十五届全国离子色谱学术报告会在四川省成都市新华国际大酒店盛大召开。本次会议由中国仪器仪表学会分析仪器分会离子色谱专业委员会主办,会议邀请国内离子色谱界的专家做大会特邀报告、邀请报告、专题报告,还邀请到国内外色谱仪器与相关设备、部件生产

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测

实验步骤一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中,蛋白

转基因食品检测技术

转基因食品是指利用生物技术,将外源基因转移到动物、植物或微生物等其他物种中,从而改造生物的遗传特性,使其在性状、营养品质等方面向人类所需的目标转变,由这些转基因生物为直接食品或原料加工生产的食品就是转基因食品。自1983年世界第一例转基因作物马铃薯问世以来,目前各国已经试种的转基因植物超过4500种

免疫学检验中的酶免疫技术

 目前,免疫学检验中的标记技术主要包括酶免疫技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。其中酶免疫技术是以酶标记的抗体(抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。作为经典的三大标记技术之一,酶免疫技术在检验医学中得到广

科学时报:发展食品快速检测技术刻不容缓

今年2月,海南“毒豇豆事件”暴露出果蔬农残快速检测技术的缺陷。  海南豇豆一次次逃过例行的快速检测,最终在实验室的色谱检测中才查出了违禁高毒农药的具体品种和残留量。这让媒体对农残快速检测技术产生质疑。  我国目前普遍使用的农残速测法是酶抑制法。酶抑制法快速检测技术为什么让高毒农药一再漏网?

China Lab 2014技术研讨会主会场演讲报告

  2014年3月12日,由广东省对外科技交流中心、国药励展展览有限责任公司、广东国际科技贸易展览公司主办的广州国际分析测试及实验室设备展览会暨技术研讨会(China Lab 2014)在广州保利世贸博览馆盛大开幕。12日上午召开的中国(广州)分析测试论坛主会场共邀请到诸位专家学者就蛋白质的

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测(二)

2.3 半定量蛋白质印迹法通 常 认 为 蛋 白 质 印 迹 法 是 定 性 的 ,但 当 加 入 特 定 对 照 时 ,它 也 可 成 为 一 种 定 量 方 法 。当 E L I S A 无 法 用 于 某 种 样 本 ,或 是 当 生 物 样 本 中 的 某 种 组 分 会 干 扰 E

转基因食品的检测方法,你知道多少?

  从1996年转基因作物开始进行大规模商业化以来,它在全球的种植面积迅速扩大,目前全球转基因作物种植面积已达25亿公顷,同时转基因作物的种类和转基因性状也在不断丰富。但是转基因作物作为一种新物种,其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2

2015有机/生物分析大会 两院士发表前沿报告

  分析测试百科网讯 4月17日,中国化学会第十八届全国有机分析及生物分析学术研讨会在上海复旦大学召开。中科院大连化学物理研究所的张玉奎院士、中国科学院生态环境研究中心的江桂斌院士、南京大学生命分析化学国家重点实验室的鞠熀先教授和中科院化学研究所活体分析化学科学院重点实验室的陈义研究员等众

生物检测技术在食品检验中的研究进展

  摘要:随着经济的发展,人们的物质生活水平不断提高。对食品安全问题也也越来越重视。近些年,随着食品安全问题屡屡见报,使得视频检测检验机构的工作压力变大,要求也更高。同时,关于食品检测检验的方法,也成为人们关注的重点。目前,我国食品检测机构主要根据不同食品的检验要求,采取不同的检测方法。本文主要针对

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测2

四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用,但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术,因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2),问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常都是

Western Blot的过程与优化,着重于化学发光检测(一)

一、蛋白质印迹法蛋白质印迹 (Western Blotting) 法是在混合的复合物中鉴定和定量特定蛋白质的一种有效且常用的方法 (Towbin et al. ,1979)。这一技术对固定在硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯 (PVDP) 膜上的蛋白质样本进行非直接的检测。在常规的蛋白质印迹中,

酶免疫分析技术进展与自动化

郝繁运   综述 中国误诊学杂志  2007年 第一期  第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编 摘要:本文主要介绍了酶免疫分析的发展现状,从酶免疫分析标记技术若干环节的技术进步、在方法学上与现代化技术的融合与发展、酶免疫分析技

试论转基因食品检测技术研究进展

  【摘 要】随着科学技术的迅猛发展,转基因食品大量出现,并且大量涌入市场。转基因食品到底对人们的健康有没有影响,至今还没有一个定论,因此,对转基因食品的检测受到了世界各国卫生组织机构的广泛关注。    随着现代科技的快速发展,以基因工程为代表的现代生物技术也取得了令人注目的成绩,特别是与

中国(广州)分析测试论坛报告集锦(一)

华南师范大学 贾丽教授   来自华南师范大学激光生命科学研究所&激光生命科学教育部重点实验室的贾丽教授带来报告“在线富集毛细管电泳技术及应用”。   首先,贾教授介绍了毛细管电泳仪的基本组成、特点、分离模式和局限性等等。   接着,贾教授以水溶性维生素的富集、核酸的富集和激素类物质

蛋白质印迹法速成知识ABC

  蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。  蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔

【总结】6种食品安全检测大法:色谱、光谱和基因芯片等

  随着社会的发展,科学的进步,食品检测技术作为衡量食品是否安全的手段之一,在食品安全的保障体系占有越来越重要的地位。近年来,食品安全检测技术发展迅速,在食品检测方面应用较为成熟。目前,常见的食品安全检测技术有以下几种。  色谱分析法  色谱分析法又称色谱法、色谱分析、层析法,是一种分离和分析方法,

免疫组化技术全程原理剖析以及案例解答

1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞

酶活性的测定实验

连续性检测             实验方法原理 1.酶的量或浓度可以用摩尔量表示,或者用酶单位的活性表示。酶活力=每单位

酶活性的测定实验

酶活性的测定可应用于:(1)酶动力学的研究;(2)酶抑制的研究。实验方法原理1.酶的量或浓度可以用摩尔量表示,或者用酶单位的活性表示。酶活力=每单位时间转化的底物摩尔数=速率×反应体积。酶活性是存在的活性酶量的量度,取决于指定的条件。SI单位是katal,1 katal = 1 mol /s,更实际

原位杂交组织化学概述

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

原位杂交组织化学技术的基本方法

一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成功,核酸自动

蛋白质凝胶染色法实验

实验步骤 总蛋白质的检测 1. 总蛋白质色度法染色 简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群,使得考马斯亮蓝(C B B )—直是最普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂。如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度,那么银