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β内酰胺酶单克隆抗体和多克隆抗体的制备(下)

1.7 抗体纯化1.7.1 多克隆抗体的纯化采用辛酸-饱和硫酸铵法纯化抗β-内酰胺酶的兔血清,2次滴加饱和硫酸铵的最终体积分数分别为50%和40%。将沉淀用少量PBS溶解后转入透析袋中,用PBS溶液透析48h,利用紫外分析法检测透析液直至透析完全。1.7.2 单克隆抗体的纯化采用PEG6000沉淀法纯化Balb/C小鼠的腹水,沉淀用50mmol/LTris-HCL溶液(pH8.0)溶解,冰浴除杂蛋白,即得粗提单克隆抗体,用SDS-PAGE对抗体纯度进行鉴定。2 结果与分析2.1 免疫原通过SDS-PAGE分析β-内酰胺酶和青霉素酶,两种蛋白的分子质量及纯度见图1。两种蛋白在分子质量为30ku处均有明显的蛋白表达,分子质量数据与预期相符。β-内酰胺酶经SDS-PAGE分析,纯度达100%,与说明书一致。青霉素酶经Bandscan软件分析,纯度达61.4%,含有大量杂蛋白。使用纯度较好的β-内酰胺酶作为免疫原。2.2 兔抗β-内酰胺......阅读全文

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