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RNA提取和RTPCR

真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码区,才形成成熟的mRNA,由mRNA再翻译成蛋白质。所以,如果直接从真核生物的基因组DNA获取目的基因,克隆再表达,试图获取目的蛋白的思路是行不通的,因为获取的DNA里面会含有非编码区。要表达真核生物的基因并表达出相应的蛋白,只能通过提取其mRNA并RT-PCR这条颇费周折的途径1.RNA的提取RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。1.1 分离高质量RNA成功的cD......阅读全文

植物组织RNA提取的难点及对策

植物组织RNA提取的难点及对策  从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究

植物组织RNA提取的要点与技巧

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA 。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看

临床样本核酸提取全攻略

¤ 临床检验样本RNA的提取人和动物全血、血清、血浆、脑脊液、人淋巴细胞中提取总RNA或病毒RNA——血液(液体样本)总RNA快速提取试剂盒(离心柱型)货号:RP4001  700元/50次血清、血浆、全血(或其他含病毒的液体)中同时提取病毒基因组和RNA——病毒基因组DNA/RNA快速提

一种无酚/无氯仿组织研磨从热带木本植物中提...(二)

三、结果1、无苯酚/氯仿的CTAB / PVP / SDS-based RNA提取在下面介绍的第一批实验中,我们开发并测试了一种使用40-60 mg牛油果、夏威夷果和芒果成熟叶片的冷冻叶组织提取RNA的方法。在发表的文献中,用于困难树种开发的大多数RNA提取方法,通过使用CTAB / PVP

先进科技 抢先体验

先进科技 抢先体验你还在为你的核酸提取发愁吗?你还在为你的科研经费发愁吗?东西越贵就一定越好吗?不!体验一下BioTeke给你带来的从核酸提取、PCR、RT-PCR到荧光定量的完美解决方案吧! ¤ 你知道如何保护样品的RNA不降解吗?已经有很多人在用了,如果你还不知道,赶快行动吧

Access RT-PCR系统问题解答

1)什么是Access RT-PCR?2)什么是Access RT-PCR系统?3)总RNA能否作为模板,是否一定需要 poly(A)+RNA?4)使用Access RT-PCR系统需要的RNA的量是多少?5)同一般常用方法相比较,Access RT-PCR系统有哪些优点?6)使用Access RT

PCR仪的用途及使用方法

 PCR的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉

RNA提取与RT-PCR(1)

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时,会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋

样品总RNA的提取

实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即:样品细胞或组织的有效破碎;有效地使核蛋白复合体变性;对内源RNA酶的

RNA提取和RT-PCR

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时,会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是

RNA提取与RT-PCR

 1.RNA的提取  RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,zui后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。  1.1分离高质量RNA  成功的cDNA合成来

分子生物学相关实验步骤及注意事项(一)

刚进实验室的小伙伴们,当你们在进行RNA的提取,RT-PCR和QPCR实验时,是否会有这样的感受,明明是按照实验步骤往下做的,实验结果却不如人意,甚至很糟糕呢?小编我也曾经被实验狠狠地虐过呢~为了减少实验对亲们的打击,在此献上自己在实验过程中的一些小经验,希望能帮助到各位小伙伴们~(一)RNA提取篇

PCR仪的用途及使用方法

PCR仪的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码

获得高质量土壤RNA的10个建议

前面的文章我们介绍了如何提取土壤DNA。大篇幅详细讲解了影响DNA得率和纯度的研磨均质、化学试剂(重点是裂解缓冲液)等问题。做DNA远没有做RNA压力大。不用太担心降解,得率还挺高。RNA就不一样。。。提取土壤RNA是环境分子生物学研究最难的研究方法之一。RNA提取本身就是件艰巨的任务,提取土壤的R

总RNA的提取

 完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)有

总RNA提取试剂(Trizol法)使用说明

『用途与特点』1.    本试剂盒可用于几乎所有新鲜或液氮保存的动物和植物组织、昆虫和细胞RNA的快速提取,通用性好。2.    无须DNA酶、RNA酶抑制剂等。3.    所需样品量少,并且可根据起始材料的多少自行调整。4. 

总RNA的提取和纯化的操作规程

完整RNA 的提取和纯化,是进行RNA 方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点,即1):样品细胞或组织的有效破碎;2),有效地使核蛋白复合体变性;3),对内源RNA酶的有效抑制;4)

多糖多酚植物RNA提取的利器

众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA, 而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。RNA提取的常见难

赛默飞世尔公司参与推出禽流感快速高通量检测新技术

        赛默飞世尔公司产品KingFisher系列自动化磁珠提取纯化仪器,联合Invitrogen公司Ambion病毒RNA提取试剂盒,将传统方法的禽流感检测由21天缩短至4小时左右。此技术经过美国国家兽医服务实验室(NV

RT-PCR实验方法大全

RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存在,不是单

实质等同性(转录组学)实验

实验材料:小麦  试剂、试剂盒:β-巯基乙醇                                   &nb

RNA的分离与纯化

包括Northern杂交在内的许多分子生物学实验均是以RNA为材料,mRNA的制备也需要一定质量的总RNA样品,RNA的数量、纯度与完整性将直接影响这些实验的结果。RNA中rRNA的数量最多,占总量的80%~85%;tRNA及核内小分子RNA占15%~20%;mRNA仅占1%~5%。由于各种rRNA

【锐赛小课题】miRNA研究之动物总RNA的提取与电泳

  动物总RNA的提取与电泳   I. 实验目的与要求   A. 理解和掌握提取和纯化动物总RNA的技术原理和操作方法。   B. 理解和掌握通过电泳鉴定提取所得的动物总RNA的技术原理和操作方法。   II. 实验原理和背景知识   A. RNA是生命活动中基因表达过程非常重要的生物

miRNA研究之动物总RNA的提取与电泳

动物总RNA的提取与电泳I.实验目的与要求A. 理解和掌握提取和纯化动物总RNA的技术原理和操作方法。B. 理解和掌握通过电泳鉴定提取所得的动物总RNA的技术原理和操作方法。II. 实验原理和背景知识A. RNA是生命活动中基因表达过程非常重要的生物大分子,如mRNA,它携带了DNA的全部编码信息。

改善RNA提取质量的十大要点

RNAse的无处不在导致了RNA的脆弱敏感。要改善RNA提取的质量,专家为你介绍在RNA纯化过程中要特别注意的10个问题。 在收获组织及细胞死亡之后,应立即灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀

RT-PCR实验方法总结大全

生物谷: RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求:1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng或1ug。2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA存

增加RT-PCR灵敏度

分离高质量RNA成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍/酸性酚的一步法。Trizol试剂法(见下图)将一步法加以提高,可以从多种

快速检测新冠病毒 它是怎么做到的?

  新型冠状病毒(2019-nCoV)引发的疫情引起了全国乃至全世界人民的关注。其中,有一个问题引发了广泛讨论:为什么确诊人数在2020年1月18日之后出现了爆发性增长?  作为生物检测技术的研究者,笔者希望借此机会跟大家探讨一下,如何诊断一个新发病原体。图1 新型冠状病毒武汉株02”,采自武汉环境

【盘点】新型冠状病毒快速检测有哪些新科技?

   新型冠状病毒(2019-nCoV)引发的疫情引起了全国乃至全世界人民的关注。其中,有一个问题引发了广泛讨论:为什么确诊人数在2020年1月18日之后出现了爆发性增长?中国为什么能快速检测新冠病毒?图片来源于网络  作为生物检测技术的研究者,笔者希望借此机会跟大家探讨一下,如何诊断一个新发病原体

快速检测新冠病毒,有哪些新科技

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