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常用的分子生物学基本技术(三)

DNA序列分析(DNA sequencing) 应用各种突变检测技术检测到的基因突变,最后都需用序列分析才能确定突变类型及突变位置,其效率可以达到100%。现在的测序方法已与经典的方法有了很大的不同,其基本原理虽仍是双脱氧终止法,但自动化程度大为提高,操作更简便,测序时间也大大缩短。随着PCR技术与测序联合使用,不需经过M13亚克隆步骤,故称为直接测序法(direct sequencing,DS)。DS法测序的模板主主要来源于PCR,应用不对称PCR(asymmetric PCR)和基因组扩增转录同步测序法(genomic amplification with transcript sequencing,GAWTS)等,使单链产物大大增加。近年来,PCR循环测序法的建立,使模板扩增与同步进行,引物用四种不同前颜色的荧光标记,使每个样品的四个测序反应可在一个反应管和一个泳道内进行,大大提高了测邓的自动化程度。目前PE公司推同出的D......阅读全文

常用的分子生物学基本技术1

DNA重组技术(或基因工程)是20世纪生物学的伟大成就,并已渗透到生命科学包括医学 各个领域,为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用,着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍!

  常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍!   核酸分子杂交技术   由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(一)

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

实时荧光定量PCR技术介绍

实时荧光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方

讲解实时荧光定量PCR技术

 实时荧光定量PCR (real time fluorogenetic quantitative PCR, FQ-PCR),是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术。它是一种在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析

体外DNA重组技术-1

在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子,再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括:(1)获得外源DNA:外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链

DNA分子克隆的几个概念

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体(vecors)在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而

常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍(二)

核酸原位杂交用特定标记的已知顺序核酸作为探针与细胞级或组织切片中核酸进行复性杂交并对其实行检测的方法,称为核酸原位杂交(nucleic acid hybridization in situ)。用来检测DNA在细胞核或染色休上的分布,与细胞内RNA进行杂交以研究该组织细胞中特定基因表达水闰;还

重组质粒的构建设计

基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遗传物质,在体外切割,拼接和重新组合,然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞,使外源DNA 在受体细胞中进行复制和

重组质粒的构建设计

基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遗传物质,在体外切割,拼接和重新组合,然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞,使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达。按人们

重组质粒的构建设计

基因工程基因工程又称遗传工程、DNA 重组技术、分子克隆等。它是七十年代在分子生物学发展的基础上形成的新学科。所谓基因工程,就是在分子水平上,用人工方法提取(或合成)某一生物的遗传物质,在体外切割,拼接和重新组合,然后通过载体把重组的DNA 分子引入受体细胞,使外源DNA 在受体细胞中进行复制和表达

医学真菌检验技术

医学真菌学检查是诊断真菌病的重要依据,随着真菌感染病例的日益增多,对实验室的诊断也提出了更高的要求。不论是患者浅部或深部感染诊断,几乎全依赖于临床标本的真菌学检查。特别是系统性真菌感染,其早期特异的诊断方法是挽救患者生命的关键,而病原真菌的形态结构十分多样,在不同条件下同一真菌也可有不同特点的形态。

江西省医疗机构临床实验室管理办法实施细则

    第一章 总则     第一条 为加强我省医疗机构临床实验室的建设与管理,提高临床检验水平,保证医疗质量和医疗安全,根据《医疗机构临床实验室管理办法》,结合我省实际,制定本实施细则。    

流式细胞技术基本原理应用和发展趋势

流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成

盘点:31项与免疫学有关的分子生物学实验技术

  现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解,并且导致了免疫新策略的产生,免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。  一、GST pull-down实验  GST是指谷胱甘肽巯基转移酶,GST pull-down实验是一个行之有效的验