动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用显微镜，电镜等直接观察记录，充分满足实验的要求。另外还具有研究范围比较广泛，研究费用相对经济等优点。然而，细胞培养也有其局限性。由于培养的细胞脱离了机体复杂的环境条件，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。尤其是体外反复传代、长期培养的细胞，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。因此，应将体外培养的细胞视为一种既保持动物体内原细胞一定的性状又具有某些改变的特定的细胞群体。由于细胞培养技术的优点是其他实验方......阅读全文
动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤
实验概要通过本实验掌握传代细胞培养的基本方法，了解无菌操作的基本原则。掌握磷酸钙介导的贴壁细胞的通用转染方法。了解细胞凋亡的形态特征，掌握细胞凋亡DNA梯度（“DNA Ladder”）电泳检测法。实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤（二）
实验试剂细胞营养液（DMEM液体培养基，10％胎牛血清，双抗100单位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mM EDTA·Na），Hank’s液。2. 2×HBS液（280mMNaCl, 10mMKCl, 1.5mMNaHPO4·2H2O, 12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤（一）
实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较
外源基因的概念和功能特点
中文名称外源基因英文名称exogenous gene定 义经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
外源基因进入细胞主要方法介绍
外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和
外源基因人工转化转染的方法
将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生，也可以人为发生。人工转化转染方法包括：（a）化学方法，有磷酸钙沉淀法、DEAE -葡聚糖络合和脂质介导的DNA转化法；（b）物理方法，包括电穿孔、微注射和基因枪法；（c）重组法，比如利用病毒作为载体。
外源DNA的基因特点
基因有两个特点，一是能忠实地复制自己，以保持生物的基本特征；二是基因能够“突变”，突变绝大多数会导致疾病，另外的一小部分是非致病突变。非致病突变给自然选择带来了原始材料，使生物可以在自然选择中被选择出最适合自然的个体。含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。除某些病毒的基因由核糖核酸（
外源基因转化的用途
利用外源基因转化已经产生了转基因学科，利用重组DNA技术可以将以前没有的新特性引入生物体。通过转基因创造的生物体很多，从细菌到哺乳动物，包括绵羊和猴子，它们有多种用途：用于研究发育遗传学、疾病过程和基因调控等。转基因动物可以生产药物，并增加牛奶或肉类的产量。来自转基因动物的组织和器官可以用于输血和移
外源基因的诱导表达
1．目的了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。2．原理外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长，lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG（异丙基硫代-b-D-半乳糖），解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-
基因导入的物理方法
1.1DNA直接注射法 ：是目的基因导入的最简单方法，但注入量有限，能够接触到的肿瘤细胞有限，故获得的肿瘤细胞转化率很低，多通过肿瘤局部多点注射给药。 1.2颗粒轰击技术 将目的基因包被金属以后，利用高压发射装置，加速包裹目的基因的金属颗粒进入细胞，从而提高肿瘤细胞的转化率。
基因导入的化学方法
即用化学方法构建非病毒载体系统，借之完成基因转导。主要包括以下两种。 1脂质体载体 脂质体载体方法具有安全、简单、低毒、无免疫原性等优点，适用于注射方法进行器官靶向性转移并有一定的转移效率。是除病毒载体转移方法之外的另一种有价值的体内基因转移方法。多用于体外转化细胞，或通过瘤组织内注射进行体
基因导入仪的工作原理
细胞电穿孔技术利用高压电脉冲使细胞膜发生瞬间的可逆穿孔，对受体细胞产生的扰动很小，强度适当的电脉冲会使细胞的外壁产生许多“小孔”，此时，溶液中的基因就会通过这些小孔进入细胞，经过一段时间后，细胞膜将会自动修复，这样就实现了电脉冲的基因导入。
验动物内耳基因导入研究进展
半世纪来，科学家们假设外源DNA介导的基因改造技术可能成为对人类遗传疾病的一种有效治疗手段，虽然将理论运用于临床实践的过程漫长而曲折，但基因治疗已经成为攻克遗传性耳聋的一项崭新治疗模式而充满希望。从内耳的解剖特点看,由于耳蜗骨迷路和内耳血迷路屏障的存在，耳蜗成为一个相对独立的器官,为内耳基因治疗
细胞化学词汇外源基因
中文名称：外源基因英文名称：exogenous gene定 义：经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
外源基因转移技术介绍
外源基因的转移：基因转移（gene transfer）是将外源基因导入细胞内，其转移方法较多，常用的要有下列几类：1）化学法：将正常基因DNA（及其拷贝）与带电荷物质和磷酸钙、DEAE－葡萄糖或与若干脂类混合，形成沉淀的DNA微细颗粒，直接倾入培养基中与细胞接触，由于钙离子有促进DNA透过细胞有作用
关于外源基因的基本介绍
将外源基因导入生物体的过程称为转化。这可以自然发生，也可以人为发生。人工转化转染方法包括：（a）化学方法，有磷酸钙沉淀法、DEAE -葡聚糖络合和脂质介导的DNA转化法；（b）物理方法，包括电穿孔、微注射和基因枪法；（c）重组法，比如利用病毒作为载体。 细菌、植物和动物的基因转化具有重要的研究
动物细胞培养的概念和方法
动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，生长，增殖。1、细胞或组织。2、常用方法物理：剪刀剪碎，化学法：胰蛋白酶，胶原蛋白酶3、制作细胞悬浮液，方法：加培养液。形成细胞悬浮液4、培养细胞株，原代培养，传代培养5、形成细胞系，传代培养，遗传物质的改变。
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤2
10xT4噬菌体DNA连接酶缓冲液200mmol/L同Tris.Cl(pH7.6)50mmol/K MgCl250mmol/L二硫苏糖醇500μg/ml 牛血清白蛋白（组分Ｖ.Sigma产品）（可用可不用）该缓训液应分装成小份，贮存于－20℃。另外，再设立两个对照反应，其中含有（1）只有质粒载体；（
外源DNA和质粒载体的连接反应原理及实验步骤1
外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂
基因导入仪的基本原理
基因导入仪的基本原理基因导入仪是生物领域研究中的一种常用的仪器。广泛应用于各种动物、植物细胞和微生物的电穿孔，也可作细胞杂交、融合、基因导入的研究。基本原理 国内外众多学者对适当的脉冲电磁场作用下，细胞膜发生电穿孔的现象展开研究。细胞电穿孔技术利用高压电脉冲使细胞膜发生瞬间的可逆穿孔，对受体细胞产
基因导入仪基本原理
基因导入仪是生物领域研究中的一种常用的仪器。广泛应用于各种动物、植物细胞和微生物的电穿孔，也可作细胞杂交、融合、基因导入的研究。 基因导入仪的基本原理 超声波探伤仪国内外众多学者对适当的脉冲电磁场作用下，细胞膜发生电穿孔的现象展开研究。细胞电穿孔技术利用高压电脉冲使细胞膜发生瞬间的可逆穿孔，
离子导入仪的原理和特点
原理 （中医定向透药治疗仪）由微电脑控制用户操作、显示、治疗时间。其波形有微电脑直接合成，具有信号稳定，连续可调的特点。信号经功率放大后输送到治疗部位。 仪器特点： 1、超大液晶屏显示，操作简洁方便，治疗参数一目了然。 2、具备中频按摩模式和药物离子导入模式。 3、单向波形整形电路：离
动物细胞培养的原理
动物细胞在液体培养基上进行正常的生命活动，并发生有丝分裂进行增殖。
动物细胞培养的原理
动物细胞在液体培养基上进行正常的生命活动，并发生有丝分裂进行增殖。
美国放行基因编辑蘑菇和玉米－不含任何外源DNA
美国农业部对采用基因编辑技术的新型作物网开一面，是由于基因编辑后的作物，不含任何新引入的遗传物质或外源DNA。当技术飞奔时，既面临重新定义转基因，也要思考监管如何收放。 在不到一周的时间里，美国农业部相继豁免了一种基因编辑蘑菇和一种基因编辑玉米的监管。 它们都采用了一种名为CRISPR
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法l 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞1. 转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.
外源基因在真核细胞表达技术
生化方法* 磷酸钙介导的质粒DNA转染真核细胞转染前24 h，通过胰酶消化收集细胞，用适当的完全培养基以1×105至4×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60 mm组织培养皿或12孔板上。于含5%～7% CO2的37℃温箱孵育20～24 h。转染前1 h换液。2.按照下属方法制备磷酸钙-DNA沉淀：
外源基因在原核细胞表达技术
原核细胞l 用IPTG诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因 含重组表达载体的大肠杆菌菌株的构建1. PCR修饰或限制性内切酶消化分离DNA片段，片段5’端和3’端带有与IPTG诱导表达载体对应的限制酶位点。2. 含靶cDNA/基因的DNA片段与表达载体连接。3.
分子遗传学词汇外源基因
中文名称：外源基因英文名称：exogenous gene定 义：经转基因步骤导入受体细胞的基因。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）