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大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定(二)

1.4 颗粒细胞鉴定1.4.1 HE染色 取生长旺盛的第4 d的细胞,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后制成1×105/ml的细胞悬液,种植于已预置好小盖玻片的24孔培养板中,放人CO2 培养箱中,在37 ℃、5% CO2及完全饱和湿度条件下进行培养。当细胞生长至70%融合时取出玻片,用PBS冲洗盖玻片3次,每次5 min。4%多聚甲醛固定20 min。取出细胞爬片,PBS冲洗2次,苏木素染色2 min,流水冲去浮色,入盐酸酒精中分色数秒,流水冲洗3 min,镜下细胞核染色清晰,胞浆不着色。5%伊红染色2~3 min,流水冲去浮色,梯度酒精脱水,二甲苯透明,封片后光镜下观察细胞形态。1.4.2 FSHR表达鉴定颗粒细胞 细胞爬片制作同前,4%多聚甲醛固定。按以下步骤进行细胞免疫化学染色:固定好的细胞爬片,PBS洗涤3 min×3次;3% H2O2室温孵育5 min,消除内源性过氧化物酶活性,PBS......阅读全文

大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定(二)

1.4 颗粒细胞鉴定1.4.1 HE染色 取生长旺盛的第4 d的细胞,用0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA消化后制成1×105/ml的细胞悬液,种植于已预置好小盖玻片的24孔培养板中,放人CO2 培养箱中,在37 ℃、5% CO2及完全饱和湿度条件下进行培养。当细胞生长至70%融合时取出

大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定(一)

大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定 许 川1/舒为群1,/张 亮1/曹 佳2/周 新3(1.第三军医大学军事预防医学院环境卫生学教研室, 重庆 400038; 2. 第三军医大学军事预防医学院军事毒理学教研室,重庆 400038;3. 第三军医大学西南医院烧伤科, 重庆 400038) Cultur

想要实现大鼠卵巢颗粒细胞原代培养,必须完成这些步骤

大鼠卵巢颗粒细胞分离自PMSG诱导后3天的大鼠的卵巢组织,颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞,其增殖与分化直接影响着卵泡的生长启动、发育、排卵、黄体形成以及甾体激素分泌等卵巢功能活动。细胞形状呈圆形或椭圆形。    大鼠卵巢颗粒细胞原代分离培养:    1、材料准备:取21-25天雌性SD大鼠,每日皮下注

大鼠原代细胞分离与培养

  一、大鼠神经元细胞(酶消化法)   简述:新生24h或E18胎鼠,取脑,剥离海马,剪碎,木瓜酶消化,清洗过筛后铺于多聚赖氨酸包被的培养板中。   二、大鼠雪旺细胞(植块法)   简述:新生24h大鼠,取坐骨神经,剥去外膜和束膜,剪成1mm3的小块,均匀铺于培养皿内,加少量血清,37℃ C

新生大鼠心肌细胞原代培养实验(二)

 3.   用第二套手术器械进行下列操作。用眼科直镊和眼科弯剪把培养皿中的心脏周边的血凝块及纤维组织剔除掉,放在另一个预先装好D-Hank's液的培养皿中,把心脏组织再洗一遍后,将心脏组织放在另外一个培养皿中(或者其它合适容器中,视个人习惯),加少许 0.06%胰酶,用眼科弯剪将心脏

新生大鼠心肌细胞原代培养实验——原代培养技术

新生大鼠心肌细胞原代培养可应用于:(1)细胞保种;(2)用于细胞形态研究;(3)应用于临床研究。实验方法原理将大鼠的心肌细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。实验材料SD 乳鼠试剂、试剂盒低糖 DMEM、胰酶EDTA青链

用于生产MSCs的大鼠骨髓原代培养

试剂和材料: 1. 完全培养基(CCM):α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经FBS杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。含0.2μg/ml两性霉素B。过滤除菌。储存于4℃,不超过

大鼠肝星状细胞原代培养实验

胰酶消化法             实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

大鼠肝星状细胞原代培养实验

胰酶消化法             实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出,经胰酶、螯合剂(常用EDTA)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖。

大鼠骨髓原代培养用于生产MSCs

试剂和材料:完全培养基(CCM):α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经F杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。含0.2μg/ml两性霉素B。过滤除菌。储存于4℃,不超过2周;2.A;3.