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高分子量DNA的回收

SageHLS系统是美国Sage公司2017年新发布的平台,它可以直接从细胞样品中快速纯化高分子量DNA。Sage公司的首席科学官Chris Boles,一直在帮助研发团队开发SageHLS平台(HLS是高分子量DNA文库制备系统的缩写)。那么,高分子量DNA对于生命科学和生物医学研究有哪些作用?SageHLS系统如何工作?接下来还会有哪些新的开发应用?我们来听听Chris对产品的介绍。1. 问:为何高分子量DNA片段很重要?答:使用极长的DNA片段已经成为生命科学界一项丢失的艺术。 回溯到早起的人类基因组计划,因为每个实验室都要使用重组染色体、质粒,Southern印迹等技术,所以都必须考虑使用极长的DNA片段。但随着90年代初兴起的PCR技术,以及短读长NGS技术的问世,科学家们已经不再需要高分子量DNA就可以实现科研目的。现在,研究人员正在解决基因组高度重复区域,大片段结构变异以及大片段构象问题,......阅读全文

石蜡包埋组织的DNA提取及其应用

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突变和DNA甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表达和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。

石蜡包埋组织DNA提取方法

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表过和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义

石蜡包埋组织的DNA提取

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表过和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。

石蜡包埋组织DNA提取的基本方法

石蜡包埋组织的DNA提取蜡包埋组织DNA提取的基本方法影响DNA提取质量的因素提高DNA提取质量的方法  近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突瘘和

石蜡包埋组织的DNA提取方法

近10年来,现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域,为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为,人类基因组并非人们想像的那样稳定,诸如基因重排、扩增、缺失,突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生,这些改变对于基因表过和调控,以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。

DNA提取方法 影响提取质量的因素 提高提取质量的方法

一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤,是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz等(1985)最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术,是用机械的方法破碎组织,切除多余的石蜡,进入含SDS和高浓度蛋白酶K(1mg/ml)的提取缓冲液加温孵育,然后进行苯酚

国外企业“妙招” 攻克长读长测序技术中“DNA提取”的痛点?

  近年来,Pacific Biosciences、Oxford Nanopore Technologies、Bionano Genomics和10x Genomics等公司的长读长测序和基因组图谱技术越来越受欢迎。随着相关技术的推广应用,长读长测序技术在快速、高效提取高质量高分子量DNA方面的痛点

重磅新品实现需求全覆盖,安捷伦走在二代测序最前沿

  上海慕尼黑生化展期间,一个即将面试的新核酸质控平台 Agilent 4150 TapeStation 的首次亮相引起了广泛关注。这不仅仅只是一台新仪器的面世,更标志着安捷伦紧跟基因检测行业“去集中化”的全球发展趋势,实现了对不同类型客户需求的全覆盖。  慕尼黑上海分析生化展关键词之——“去集中化

磷酸钙介导的高分子量基因组 DNA 转染细胞实验

下述方法是对 Graham 与 Van der Eb(1973) 建立的磷酸转方法的改进,用高分子量基因组 DNA 代替了质粒 DNA。这一方法对建立稳定的携带补充宿主染色体基因突变的转染基因的细胞系尤其有用(Segeetal.1984,Kingsley et al.1986)。本实验来源于分子克隆

PCR 产物定量实验

            试剂、试剂盒 DNA 标准 TE PCR 产物 仪器、耗材

PCR 产物定量实验

试剂、试剂盒 DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材 荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤 方法 A: 荧光测定法荧光测定法可以在纳克级范围精确定量。荧光计和 DNA 定量试剂盒许多公司都有出售。确定荧光计是否安装了适合于特定染料的激发和发射的部件至关重要。该方法在设计上适用于配有带蓝色 LED

PCR 产物定量实验

测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少,有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法:荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤方法 A: 荧光测定

质粒提取实验方法

导论质粒DNA的小量制备质粒DNA的大量制备质粒DNA的纯化一、导论    已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA, 这些方法都含有以下3个步骤:细菌培养物的生长。细菌的收获和裂解质粒DNA的纯化。(一)细菌培养物的生长  从琼脂平板上挑取一个单菌落,接种到培养物中(有含有行当抗生素

聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用-1

第一节 概述  聚合酶链反应或多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作

PCR操作范例和PCR反应系统的组成(3)

(四)Taq DNA聚合酶的量 典型PCR反应混合物中,所用酶浓度为2.5U/μl,常用范围为1~4U/100μl。由于DNA模板的不同和引物不同,以及其它条件的差异,多聚酶的用量亦有差异,酶量过多会导致非特异产物的增加。 由于生产厂家所用兵配方、制造条件

RNA实验和方案新手必读(五)

起始材料的有效破碎和匀浆对于所有总RNA分离操作来说都是必须的要求。破碎和匀浆是两个独立分开的步骤。破碎:对于组织结构、细胞壁和细胞质膜的彻底破碎对于释放样本中所有的RNA是绝对必要的。不同样本需要使用不同的方法以达到彻底的破碎效果。不完全的破碎会导致RNA得率的显著降低。匀浆:匀浆对于减少破碎后细

质粒抽提过程中内毒素如何去除?

内毒素,即脂多糖或LPS,是革兰氏阴性菌(如大肠杆菌)细胞膜的组成部分。细菌外膜的外层脂质部分是完全由内毒素分子所构成的。单个大肠杆菌细胞约包含两百万个LPS分子,每个LPS分子由疏水的脂质A(lipid A)部分、复杂的糖类残基阵列部分及负电性的磷酸基团所组成。因此,每个内毒素分子都具有

真核基因组的组装,有纳米孔就够了

  生物通报道 农业生物技术公司KeyGene近日只利用纳米孔测序仪MinION生成的序列,组装了立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)的基因组。立枯丝核菌是一种农业害虫,感染一些重要的经济作物,包括玉米、水稻和大豆。  在BioRxiv网站的预印本上,KeyGene的Martin de

新一代测序在农业领域大放光彩

  普通农夫的谷仓里肯定没有最新款的HiSeq测序系统。不过,这并不意味着新一代测序(NGS)在农业领域就不如医学领域那么重要。  乔治亚大学的特聘教授Andrew Paterson就利用NGS来捕获群体的多样性,他将基因型与参考基因组进行比较。他领导的植物基因组作图实验室也利用NGS从不同个体中获

磷酸钙介导的高分子量基因组 DNA 转染细胞实验

实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养物试剂、试剂盒 CaCl2甘油HEPES 盐缓冲液异丙醇NaCl基因组 DNA带有选择性标志的质粒细胞生长培养基仪器、耗材 聚乙烯试管Shepherd’s crook组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所浓度。Ca

磷酸钙介导的高分子量基因组 DNA 转染细胞实验

            实验材料 指数生长的哺乳动物细胞培养物 试剂、试剂盒 CaCl2

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

            实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中

氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环DNA实验(一)

用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法,取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。连续梯度法实验方法原理用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法,取决于与线状 DN

高分子薄膜缓释技术或成为疫苗接种新方法

  据麻省理工学院新闻网1月28日报道,该校研究人员日前开发出一种类似于膏药的疫苗,这种疫苗通过高分子薄膜的方式输送药物,可提高DNA疫苗的有效性。相关论文1月27日发表在《自然·材料学》杂志网络版上。   疫苗通常由灭活病毒制成,通过刺激人体免疫系统的方式,帮助免疫系统建立屏障阻止病毒感染。然而

毛细管电泳仪在核酸分析中的应用

毛细管电泳仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。一、在DNA测序中的应

纯化DNA实验

从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法)             实验材料

纯化DNA实验_从哺乳动物细胞或组织分离DNA

基因纯化,可以用于(1)对大量提取的质粒DNA进行纯化;(2)常用的方法有柱层析法和氯化铯梯度离心法。实验材料细胞试剂、试剂盒TBS抽提缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 根据样品类型,从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤

纯化DNA实验

从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒(碱裂解法)             实验材料

纯化DNA实验

实验材料 细胞试剂、试剂盒 TBS抽提缓冲液仪器、耗材 离心管实验步骤 1. 根据样品类型,从下列方法中选一个作为步骤 1 进行操作。(1) 细胞样品① 单层培养的细胞以用冰预冷的 TBS 将单层细胞洗涤 2 次,用刮棒把细胞刮入约 0.5 ml 的 TBS 中,将细胞悬液转移到冰浴的离心管中,

应用黏粒载体构建基因组DNA文库

实验方法原理 在 λ 噬菌体中构建基因组 DNA 文库的步骤与在黏粒载体中的步骤基本一致。在这两种系统中,真核 DNA 在体外与载体 DNA 连接,形成能包装到 λ 噬菌体颗粒中的多联体。构建在 λ 噬菌体中的文库以具有感染性的重组噬菌体形式贮存和增殖。实验材料 T4 噬菌体 DNA 连接酶牛小肠碱