用经典RACE扩増3末端cDNA实验
试剂、试剂盒dNTP 溶液二硫苏糖醇TE反转录缓冲液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆转录酶poly(A)+RNA 或总 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶仪器、耗材水浴或加热仪热循环仪实验步骤试剂可以从多数大供应商那里买到该过程所需要的材料与合适的 5X 酶反应缓冲液或 10X 酶反应缓冲液。SuperscriptⅡ逆转录酶和 RNA 酶 H 可以从 Invitrogen 买到，RNasin 可以从 Promega Biotech 买到，Hercules 热稳定性 Hot-StartDNA 聚合酶可从 Stratagene 买到，Tdt 可从 Invitrogen 或 BoehringerMannheim 买到。按照供应商的说明使用酶。有多种不同的热稳定性 DNA 聚合酶，任何一种都是可用的，研究者应该寻找最有效的扩增（参照可靠性或价格）。来自 BoehringerMannheim ......阅读全文
用经典 RACE 扩増 3'末端 cDNA 实验
试剂、试剂盒dNTP 溶液二硫苏糖醇TE反转录缓冲液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆转录酶poly(A)+RNA 或总 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶仪器、耗材水浴或加热仪热循环仪实验步骤试剂可以从多数大供应商那里买到该过程所需要的材料与合适的 5X
用经典 RACE 扩増 3'末端 cDNA 实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液二硫苏糖醇TE反转录缓冲液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆转录酶poly(A)+RNA 或总 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶仪器、耗材 水浴或加热仪热循环仪实验步骤 试剂可以从多数大供应商那里买到该过程所需要的材料与合适的
用经典 RACE 扩増 3'末端 cDNA 实验
试剂、试剂盒 dNTP 溶液 二硫苏糖醇 TE 反转录缓冲液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptⅡ逆转录酶
用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端
这一实验方案分为 6 个阶段。第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化; 第 2 阶段：完整 RNA 去帽; 第 3 阶段：RNA 寡核苷酸的制备; 第 4 阶段：RNA 寡核苷酸与细胞 RNA 的连接; 第 5 阶段：反转录; 第 6 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康
用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂 酶和酶缓冲液 核酸和寡核苷酸 仪器、耗材 特殊设备
用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端（一）
试剂、试剂盒 缓冲液、溶液和试剂酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸仪器、耗材 特殊设备实验步骤 第 1 阶段：降解 RNA 的去磷酸化一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂乙酸钠，3mol/L,pH5.2乙醇二硫苏糖醇（DTT)（0.1mol/L)苯酚/氯仿（1:1，体积比）2. 酶和酶缓冲液磷酸酶缓冲液，10X
用新 RACE 法扩増 cDNA 的 5'末端（二）
第 3 阶段：RNA 寡核苷酸的制备选择离 T7 或 T3RNA 聚合酶作用位点下游约 lOObp 处可以线性化的质粒 [见图 25-3(b)]。因为来自多克隆位点回文序列的引物用于 PCR 效果不好，因此比较理想的是用在多克隆位点克隆进某个插入片段的质粒。一个已经验证过的质粒是 pBS-S
用经典 RACE 扩增 cDNA 的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物 poly(A)+RNA 或总 RNA 反转录缓冲液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptI
用经典 RACE 扩增 cDNA 的5’末端实验
试剂、试剂盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓冲液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆转录酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脱氧核苷酸末端转移酶加尾缓冲液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot
用经典 RACE 扩增 cDNA 的5’末端实验
这一实验方案分为 3 个阶段。 第 1 阶段：反转录产生 cDNA 模板 ；第 2 阶段：在第一链 cDNA 产物末端加 poly(A) 尾 ；第 3 阶段：扩增。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或总 RNA反转录缓