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叶绿体被膜完整性的测定

叶绿体被膜完整性的测定可用于:(1)促进光合作用的分子机理研究;(2)检测细胞活性。实验方法原理由于玻璃氰化钾不能透过被膜,故完整叶绿体在等渗介质中不能进行玻璃氰化钾光还原的Hill反应。而失去完整被膜的叶绿体,铁氰化钾可以进入类囊体进行Hill反应。根据这一原理,比较胀破与未胀破的叶绿体Hill反应速率,就可计算叶绿体被膜的完整度。实验材料植物材料试剂、试剂盒铁氰化钾NH4Cl仪器、耗材氧电极测氧全套装置烧杯微量进样器洗耳球实验步骤1. 取0.1ml叶绿体提取液加到0.9ml的蒸馏水中并搅拌1min,使叶绿体被膜胀破,加1ml测定介质Ⅰ悬浮备用。2. 取0.1ml未胀破叶绿体提取液加入反应杯中,视反应杯体积加入测定介质Ⅱ,加入适量铁氰化钾和NH4Cl,使铁氰化钾和NH4Cl的最终浓度都为1mmol/L。搅拌,平衡1min,照光测定Hill反应放氧速率,记录5min,然后清洗反应杯。3. 将已胀破叶绿体加入反应杯中,再加入适量测......阅读全文

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验

实验材料黄化苗                                         &n

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验

实验材料黄化苗试剂、试剂盒匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材分光光度计实验步骤在选好植物材料和匀浆缓冲液后,接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等(见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方法,或者

植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验(二)

3.5 纯度鉴定可以通过各种细胞器标志性酶的活性来确定线粒体的污染程度。过氧化物酶体可以鉴定过氧化氢酶、羟基丙酮酸还原酶或者乙二醇氧化酶的活性;叶绿体可以用叶绿素含量,白色体可以用类胡萝卜素的含量或碱性焦磷酸酶的活性;乙二醛循环体可以用异柠檬酸裂解酶的活性;内质网可以用对抗霉素 A 不敏感的细胞