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RNA介导的基因沉默实验

实验材料pGEM-T 载体DNA 模板试剂、试剂盒dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套缓冲液限制酶仪器、耗材PCR 纯化试剂盒或柱子实验步骤一、筛选目的基因片段的参数1. 序列( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 cDNA 序列或预测的基因序列设计引物,用反转录-PCR ( RT- PCR) 方法扩增 cDNA 上的一部分序列。如果没有目的基因的基因组序列,可以用其他物种中基因的序列去搜索已知序列的 cDNA。如果目的基因是多基因家族的成员,就需要与家族成员进行多重比较以指导 PCR 引物的设计。要扩增的基因区域以及它与其他基因的相似性决定了该 RNAi 载体靶向单个 mRNA 还是多个相关基因的转录产物。( 2 ) 扩增编码区和非编码区(UTR ) 都能获得好的沉默效果。由于沉默机制依靠序列同源性,因此相关的 mRNA 序列有可能被交叉沉默。如果没有特殊要......阅读全文

RNA介导的基因沉默实验

实验材料pGEM-T 载体DNA 模板试剂、试剂盒dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套缓冲液限制酶仪器、耗材PCR 纯化试剂盒或柱子实验步骤一、筛选目的基因片段的参数1. 序列( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 cDNA 序列

RNA介导的基因沉默实验

实验材料pGEM-T 载体                                                                  DNA 模板                                                          试剂、试剂盒d

RNA介导的基因沉默实验

实验材料 pGEM-T 载体DNA 模板试剂、试剂盒 dNTP 混合物DNA 聚合酶(Sigma) 及配套缓冲液限制酶仪器、耗材 PCR 纯化试剂盒或柱子实验步骤 一、筛选目的基因片段的参数1. 序列( 1 ) 构建一个指定的 RNA 沉默载体首先要进行生物信息学分析。根据目的基因对应的已知 c

RNA干扰(转录后基因沉默)实验

RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。目前主要用于(1)特异性剔除或关闭特定基因的表达 (2)探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗 (3)使

RNA干扰(转录后基因沉默)实验

RNA干扰             实验方法原理 1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsR

RNA剪接和基因沉默之间的联系

为了识别在RNA干涉(RNAi)和微RNA介导的基因表达调控中所涉及的因素,Gary Ruvkun及其同事对86种真核生物进行了系统发生分析,所得到的候选物再用转录和蛋白组相互作用数据进行Bayesian分析,来估计它们参与小RNA调控的概率。所识别出的小RNA辅因子中大约一半是RNAi沉默所必需的

RNA剪接和基因沉默之间的联系

为了识别在RNA干涉(RNAi)和微RNA介导的基因表达调控中所涉及的因素,Gary Ruvkun及其同事对86种真核生物进行了系统发生分析,所得到的候选物再用转录和蛋白组相互作用数据进行Bayesian分析,来估计它们参与小RNA调控的概率。所识别出的小RNA辅因子中大约一半是RNAi沉默所必需的

RNA沉默的分类

植物中的RNA沉默根据作用靶标可以分为两类:以RNA为靶标, 使其降解或抑制蛋白翻译, 称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS);以染色质为靶标, 使其基因启动子或组蛋白甲基化从而抑制 RNA 转录的起始, 称为转录基因沉默(trans

RNA沉默的作用

植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉

RNA 沉默的概念

RNA 沉默(RNA silencing)或基因沉默(gene silencing)是广泛存在于植物、动物、线虫和真菌等真核生中的一种高度保守的、序列特异的 RNA 降解机制. RNA 沉默对于调控发育、维持基因组的稳定性以响应生物和非生物胁迫等具有重要作用.