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Nature:用于蛋白质分析的单分子DNA技术

George Church 及同事开发出用于并行蛋白相互作用分析、借助用于蛋白功能分析的单分子DNA方法的一个“单分子相互作用测序”(SMI-seq)技术。 SMI-seq的工作原理是,通过核糖体显示或酶结合将蛋白耦合到DNA识别符或“条码”上。 这些条码化的蛋白然后在水溶液中被一起分析,并在一个聚丙烯酰胺薄膜中被固定。 接下来,条码RNA被放大,并通过DNA测序被分析。该方法可以实现精确的蛋白量化以及对分子结合亲和力和特异性的同时测定。......阅读全文

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

Science发表单分子成像新应用 年前将入职西湖大学

  真核生物基因组极具复杂性。如何将宏观尺寸的基因组DNA包装入微米级的细胞核中是生命科学的基本问题之一。在细胞周期中,基因组具有高度组织性。在细胞周期间期,基因组形成不同的区室(Compartment)和结构域(Domain),而在有丝分裂期,基因组被高度凝聚成X形染色体。一类高度保守的ATP酶多

组蛋白研究进展速览!

  本文中,小编盘点了多篇研究报告,共同解析科学家们在组蛋白研究上取得的新成就,与大家一起学习!图片来源:Daniel N. Weinberg et al,doi:10.1038/s41586-019-1534-3  【1】Nature:揭示组蛋白标记H3K36me2招募DNMT3A并影响基因间DN

凝胶迁移实验(EMSA)

实验方法原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列

腺病毒简介

腺病毒载体的优点:1. 宿主范围广, 对人致病性低腺病毒载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞,因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。特别需要指出的是:腺病毒具有嗜上皮细胞性,而人类的大多数的肿瘤就是上皮细胞来源的。另外,腺病毒的复制基因和致病基因均已

染色质免疫沉淀技术的应用

随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域,要想提供蛋白因子直接调控的证据,需要直接检测蛋白质-DNA的相互作用,而染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)就是一种研

表观遗传学修饰

组蛋白修饰 表观遗传学是指表观遗传学改变 (DNA 甲基化、组蛋白修饰和非编码 RNA 如 miRNA) 对 表观基因组基因表达的调节,这种调节不依赖基因序列的改变且可遗传表观。因素如 DNA 甲基化、组蛋白修饰和 miRNA 是对环境刺激因素变化的反映,这些表观遗传学因素相互作用以调节基因

凝胶迁移实验(EMSA)

            实验方法原理 一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的

Cell特辑:免疫沉淀

  “Cell Press Selections”是由Cell出版社推出的一份推荐文章集合手册,主要介绍某个生命科学研究领域最新的进展及突出成果。相关特辑内容包括研究论文,评论性文章以及snapshots,涉及了同一领域的方方面面,更为重要的是这些文章由赞助商赞助,可以免费获取。  蛋白与DNA之间

研究揭示TALE蛋白新功能

  2012年9月27日,清华大学生命学院施一公教授研究组,医学院颜宁教授研究组和北京大学席建忠教授合作在细胞子刊《细胞―报告》(Cell Reports)在线发表论文,报道转录激活因子样效应蛋白(TALE)能够特异识别DNA-RNA杂合链,并且能够保护DNA-RNA杂合链不被核酸酶降解,这一发

凝胶迁移实验(EMSA)实验方法

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白

Cell新发现颠覆表观遗传传统认知

  来自美国托马斯杰斐逊大学的一个研究团队获得了关于组蛋白修饰作用相反的证据。在一项果蝇胚胎研究中,他们发现亲代的甲基化组蛋白并没有转移给子代DNA。相反,在DNA复制后,由新合成的未修饰组蛋白组装成了新的核小体。相关论文发布在8月23日的《细胞》(Cell)杂志上。   托马斯杰斐逊大学生物化学

Science:人黏连蛋白通过DNA环挤压折叠基因组机制被揭示

  为了将大约两米长的人DNA携带的遗传信息包装到细胞核中,人细胞所要完成的工作相当于将80公里长的线放入一个足球大小的球体中。早在1882年,德国生物学家Walther Flemming便通过显微镜进行了观察,发现了有关这种包装是如何实现的线索。他当时观察到位于卵细胞细胞核内的DNA环,这让他想起

Nature 表观遗传学进展将遗传学、环境与疾病联系了起来!

  21世纪,表观遗传学的研究得到了快速发展,同时其产生了让研究人员感兴趣和憧憬的东西,当然了,这其中也存在一些大肆宣传的成分,本文中,我们回顾了表观遗传学在过去几十年里是如何演变的,同时分析了近年来改变科学家们对生物学理解的一些研究进展;我们讨论了表观遗传学和DNA序列改变之间的相互作用,以及表观

Science:首次实时观察到凝缩蛋白挤压DNA形成环状结构

  引人注目的是,活的细胞当准备分裂时,能够将一堆杂乱的长达两米的DNA包装成整齐的微小染色体。然而,科学家们几十年来一直对这个过程是如何发生的感到困惑。如今,在一项新的研究中,来自荷兰代尔夫特理工大学卡夫利研究所和位于德国海德堡的欧洲分子生物学实验室(EMBL)的研究人员分离出这个过程,拍摄它的影

2018年9月28日Science期刊精华

  本周又有一期新的Science期刊(2018年9月28日)发布,它有哪些精彩研究呢?让小编一一道来。  1.Science:重大进展!鉴定出有害藻花产生强效神经毒素软骨藻酸的基因簇  doi:10.1126/science.aau0382; doi:10.1126/science.aau9067

Cell:细菌有助发现人体中的致癌蛋白

  人细胞会产生蛋白致癌物。癌症是一种突变疾病。在特定基因中积累了多种突变的正常细胞很可能变成癌细胞。导致癌症的突变是DNA损伤的结果。香烟烟雾和阳光等外部因素能够破坏DNA,但大多数DNA损伤似乎是由细胞内发生的事件引起的,并且是由细胞组分(包括蛋白)介导的。尽管这些事件很重要,但是它们并未得到广

Science:重磅!首次证实凝缩蛋白具有马达功能

  生物学的众多奥秘之一是:细胞如何巧妙地分配它复制的DNA到两个子细胞中?一个多世纪以来,我们已知道细胞中的DNA就好比一盘意大利面条:杂乱地混合在一起的面条。当细胞分裂时,它们必须将两米长的DNA包装成整洁的小包裹---染色体。这种包装是由凝缩蛋白(condensin)诱导的,但是科学家们对它的

谢晓亮等研究揭示DNA别构效应

  2013年2月15日美国《科学》杂志发表了题为“Probing Allostery through DNA”的研究报告,通过单分子生物物理等手段严谨地证实了DNA中确实存在别构效应。该研究揭示了DNA一个新的基本性质,不但在物理上非常有趣,而且有重要的生理意义。   该项工作是由美国科学院

如何验证蛋白-DNA相互作用的功能重要性

  7月,最新一期的冷泉港实验手册《Cold Spring Harbor Protocols》发布。按照惯例,有两篇protocol是可以免费阅读的,其中一篇介绍了如何验证蛋白-DNA相互作用的功能重要性。这篇文章节选自《真核生物的转录调控:概念、策略与技术》一书,是由美国加州大学洛杉矶分校(U

凝胶迁移实验(gel shift)基本知识问题与回答-1

(1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记

Cell子刊:“垃圾”DNA的阴暗面

在基因之间的DNA片段,散布着重复序列,曾经被认为是“基因组垃圾”,但现在科学家们了解到,一些这样的垃圾DNA并不是无害的。在《Cell Reports》发表的一项研究中,来自北卡罗来那大学(UNC)Lineberger综合癌症中心的研究人员报道称,某些短的DNA重复序列,或“垃圾DNA”,在尤文肉

Nature新闻:分子间的“殊死搏斗”

  一项单分子研究揭示出了DNA修复蛋白:RecAll如何克服其它蛋白的竞争,结合到单链DNA上,又是如何在这个过程中取胜的。这项由加州大学戴维斯分校的研究人员完成的研究观察到正准备接受修复时的单链DNA,这将有助于人们理解乳腺癌的起源。相关成果公布在Nature杂志上。   为了修复DNA双螺旋

凝胶迁移实验(gel shift)基本知识问题与回答-3

TFIIB与预启动复合物结合后,致使RNA聚合酶II和TFIIF结合到转录启始区。故TFIIB在预启动复合物的形成中有重要作用。当用纯化的 TFIID作凝胶迁移实验时,poly dI-dC不用加入结合反应中。结合缓冲液含10%甘油,20mM Tris(pH8.0), 10mM MgCl2,

原子力显微镜研究λ-DNA-组蛋白的相互作用

     对DNA与组蛋白的相互作用的认识是我们进一步了解其功能和探讨生命现象的重要基础。原子力显微镜(AFM)成像分辨率高、成像直观,且样品制备简单,不需要经过脱水、抽真空、染色、包埋等 这些会使生物分子结构发生一定改变的复杂处理过程,并可对生物分子在近生理条件下检测

病毒蛋白与基因组RNA 构筑DNA-蛋白复合结构多级可控构筑

  生物大分子在自然进化中发展出一套独特的“自下而上”自组装方式进行各种复合结构的可控装配,为多功能生物纳米材料的加工制备提供了绝佳范例。其中,核酸-蛋白质纳米复合体系的可控构筑,不仅将实现生物学上两种基本组装模式的有效结合,以提供愈加复杂的生物结构模板,还有助于体内生物大分子相互作用的深入理解,对

生物制剂中宿主残余DNA检测技术与标准的发展趋势

生物制品中残留DNA检测标准的变化2015年3月底,中国食品药品检定研究院网站的国家药品标准物质目录中新增加了一个编号为410001的产品:CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。这个由中检院与中科院联合研发,由生物制药企业参与标定的试剂盒与现行美国药典(USP)建议的检测方法同步

北大学者发表JBC封面文章:真核细胞DNA复制起始新机制

  来自北京大学生科院的研究人员发表了题为“Sap1 is a replication-initiation factor essential for the assembly of pre-replicative complex in the fission yeast Schizosacchar

染色质免疫沉淀(ChIP)技术的难点及应用-1

序言随着人类基因组测序工作的基本完成,功能基因组学的研究逐渐成为研究的热点。而基因表达的调控又是功能基因组学的一个重要研究领域。研究某个蛋白因子的调控功能,可以通过对蛋白活性(激活或抑制其活性),蛋白数量(过表达Overexpression或基因缺陷型Knockout), 以及蛋白功能(功能缺陷