送给生物实验室达人的10个偷懒技巧
1、质粒DNA提取 提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。 将amp浓度提高到200ug/ml，下班前接种，次日一早收获菌体，此时OD虽然不高，质粒丰度却不一般。菌体量少些，操作体积（管数）也小（少）。 手提质粒，如果用氛氯仿和氯仿两步抽提，再注意一下手法，严格按照参考书上面的操作的话，提出的质粒不比任何质粒提取试剂盒差，我感觉好像还好一点，我就用过一次试剂盒，比较了之后不如我手提的好，以后再也没用过了。 2、 Western Blot 做western blot的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，......阅读全文
DNA测序常见问题分析及解决办法
常见问题 具体情况 可能的原因 处理办法 备注 样品准备问题
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值？用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间（吸光度太高或太低会有较大的误差）。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其吸光度
引物溶解引物保存
1. 如何测定引物的OD值？ 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2~0.8之间（吸光度太高或太低会有较大的误差）。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1 ml 并在1 ml 标准比色皿中测定其
USE 诱变实验
本方法中，两条寡核苷酸引物杂交到变性重组质粒 DNA 双链的同一条链上。一条引物（诱变引物）携带一个拟引进靶 DNA 序列的突变，第二条引物携带一个能破坏质粒单一限制酶位点的突变。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带 mutS 表型（
USE 诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态试剂、试剂盒 退火缓冲液贮存液合成缓冲液噬菌体 T4DNA 连接酶噬菌体 T4DNA 聚合酶或测序酶单一位点的限制性内切核酸酶琼脂糖凝胶诱变引物选择引物质粒 DNA仪器、耗材 70°C
USE 诱变实验
实验材料 带 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的转化用大肠杆菌感受态 带 mut+表型的转化用大肠杆菌感受态 试剂、试剂盒
引物设计的引物设计原则
1、长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十C含量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般较Tm值低等于引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时，
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3
引物设计的引物设计原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3