等电聚焦和二维凝胶电泳实验
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液 SDS-PAGE 现成溶液 二硫苏糖醇 碘乙酰胺 仪器、耗材 等电聚焦电泳系统 二维SDS-PAGE 多凝胶系统 恒温循环器 IPG 干胶条溶胀盘 上样杯 旋转摇动混合器 实验步骤 ......阅读全文
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很长一段时间内作为各种生化分析中分辨完整蛋白质的备选方法。这主要是因为对于疏水性很强的蛋白质,SDS 是最好的增溶去污剂，所有的蛋白质，包括碱性很强的蛋白质，都向同一方向移动, 分离取决于各自的表观分子质量 (通常称为分
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（四）
再水化上样是二维凝胶电泳样品导入的最简便方法，这一方法使得样品缓冲液中的蛋白质样品在 IPG 胶条吸收样品溶液时被动导入，且蛋白质可以在整个 pH 梯度中均匀分布。在一些商品化的等电聚焦仪器中，IPG 胶条的再水化和聚焦可以用相同设备仪器完成，无需人工操作。这种仪器也可以进行所谓的主动再水化
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（三）
二、方法蛋白质样品制备稳定的样品制备对于任何成功的生物分析性测定都是至关重要的。为了增加实验的重复性, 并将预期外的变异降至最小，使用的缓冲液和材料都应该是质量最好的，并且在采购时需特别小心。应该使用小分子蛋白酶和磷酸酶抑制剂，如抑肽酶 (aprotinin)、亮抑肽酶 (Ieupeptin
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（一）
试剂、试剂盒 样品缓冲液羟乙基二硫化物细胞裂解缓冲液SDS-PAGE 现成溶液二硫苏糖醇碘乙酰胺仪器、耗材 等电聚焦电泳系统二维SDS-PAGE 多凝胶系统恒温循环器IPG 干胶条溶胀盘上样杯旋转摇动混合器实验步骤 一、等电聚焦的基本原理等电聚焦 (IEF) 是一种能根据分子内的质子接受点的 p
等电聚焦凝胶电泳原理
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
实验方法原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的p
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术可应用于：(1)蛋白质的分离提纯；（2）蛋白质组学研究。实验方法原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在