蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
实验方法原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点位置时，其静电荷数为零，在电场中不再移动，据此将蛋白质分离。 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒 丙稀酰胺 双－丙稀酰胺 载体两性电解质 尿素......阅读全文
等电聚焦凝胶电泳原理
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术可应用于：(1)蛋白质的分离提纯；（2）蛋白质组学研究。实验方法原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术
实验方法原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的p
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点 实验方法原理 实验原理蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的
等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点
等电聚焦（Isoelectric focusing，简称 IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展，已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点（pI）只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高，重复性好，样品容量大，操作简便迅速，在
聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点
一、目的：学习聚丙烯酰胺凝胶平板等电聚焦电泳测定蛋白质等电点的原理及方法。二、原理：等电点聚焦（isoelectric focusing, IEF）或简称电聚焦（electrofocusing），也曾称等电点分离聚焦电泳等。它是60年代中期出现的技术，克服了一般电泳易扩散的缺点。近年来，等电点聚
双向凝胶电泳的等电聚焦相关介绍
蛋白质是两性分子，在不同的pH环境中可以带正电荷、负电荷或不带电荷。对每个蛋白质来说都有一个特定的pH，此时蛋白质的静电荷为零，此pH值即该蛋白质的等电点(pI)。将蛋白质样品加载至pH梯度介质上进行电泳时，它会向与其所带电荷相反的电极方向移动。在移动过程中，蛋白分子可能获得或失去质子，并且随着
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（四）
9．其他要注意的事项1）等电聚焦后可用一根染色的细线（0.1mm）标出染料前沿的位置；2）不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别，使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异，若要获得好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌；3）通常，窄范围的pH梯度可以提高分辨率，但是需要时间
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
1.原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
5.电泳操作步骤：1）将蛋白样品于等体积的2×上样缓冲液混合，10000×g离心5min以除去蛋白质沉淀；2）用微量注射器将蛋白质样品加入到上样空底部，注意不要溢出来。注意：对于考马斯亮蓝染色液来说，每个泳道10-30ug的蛋白混合粗提物（我们俗称粗抗原）或者5-10ug单一蛋白组分是较合理的上样浓
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（三）
8.常见问题及解释1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
6．电泳聚焦后处理测定pH梯度：1）将凝胶条切成0.5cm或1cm的小片；2）将每小片凝胶在1ml 10mM KCl中 浸泡30min；3）测读此KCl溶液的pH值、凝胶的固定：1）将凝胶于10%三氯乙酸中浸泡10min；2）换成1%三氯乙酸溶液继续浸泡至少2h以上，以去除载体两性电解质，浸泡过夜可
蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
原理等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场
等电点聚焦电泳
中文名称等电点聚焦电泳英文名称isoelectric focusing electrophoresis定 义一种根据蛋白质等电点不同而将蛋白质在凝胶介质中分离的电泳方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。 2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁净，是
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（一）
等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场
蛋白质技术专题：蛋白等电聚焦凝胶电泳技术（二）
8.常见问题及解释1） 若产生模糊条带则证明聚焦不完全，这可能是由于电泳中的问题或大分子蛋白质限制了其在凝胶中的迁移能力。若聚焦时间过长或过短，条带的分辨率会下降。增加电压梯度可以使带形更加锐利。高分子量蛋白质在琼脂糖凝胶中可以聚焦的更好。2） 产生歪斜的条带通常由于不正确的pH梯度，检查电极是否洁
等电聚焦电泳（IEF）分离蛋白及测定蛋白质等电点
一、原理等电点聚焦（IEF）是在电场中分离蛋白质技术的一个重要发展，等电聚焦是在稳定的pH梯度中按等电点的不同分离两性大分子的平衡电泳方法。在电场中充有两性载体和抗对流介质，当加上电场后，由于两性载体移动的结果，在两极间逐步建立稳定的pH梯度，当蛋白质分子或其他两性分子存在于这样的pH梯度中时，这种
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
对于复杂混合物，如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分，通过两步正交的分离 (orthogonalseperation)，二维凝胶 (2D 胶）电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷，即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量，即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
等电聚焦和二维凝胶电泳实验
等电聚焦和二维凝胶电泳实验 试剂、试剂盒 样品缓冲液 羟乙基二硫化物 细胞裂解缓冲液
制备电泳实验——等电聚焦制备电泳
实验方法原理等电聚焦制备电泳是一种非变性制备技术。由于等电聚焦电泳技术的特点，因而是一种理想的制备方法。试剂、试剂盒电极液两性电解质Ultrodex实验步骤一、液体介质垂直柱状蔗糖密度梯度等电聚焦是原瑞典 LKB 公司早期用于制备和分析目的的等电聚焦方法。载体两性电解质在蔗糖密度梯度柱中形成 pH
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（三）
二、方法蛋白质样品制备稳定的样品制备对于任何成功的生物分析性测定都是至关重要的。为了增加实验的重复性, 并将预期外的变异降至最小，使用的缓冲液和材料都应该是质量最好的，并且在采购时需特别小心。应该使用小分子蛋白酶和磷酸酶抑制剂，如抑肽酶 (aprotinin)、亮抑肽酶 (Ieupeptin
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（二）
SDS-PAGELaemmli(1970) 描述的 SDS-PAGE 在很长一段时间内作为各种生化分析中分辨完整蛋白质的备选方法。这主要是因为对于疏水性很强的蛋白质,SDS 是最好的增溶去污剂，所有的蛋白质，包括碱性很强的蛋白质，都向同一方向移动, 分离取决于各自的表观分子质量 (通常称为分
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（一）
试剂、试剂盒 样品缓冲液羟乙基二硫化物细胞裂解缓冲液SDS-PAGE 现成溶液二硫苏糖醇碘乙酰胺仪器、耗材 等电聚焦电泳系统二维SDS-PAGE 多凝胶系统恒温循环器IPG 干胶条溶胀盘上样杯旋转摇动混合器实验步骤 一、等电聚焦的基本原理等电聚焦 (IEF) 是一种能根据分子内的质子接受点的 p
等电聚焦和二维凝胶电泳实验（四）
再水化上样是二维凝胶电泳样品导入的最简便方法，这一方法使得样品缓冲液中的蛋白质样品在 IPG 胶条吸收样品溶液时被动导入，且蛋白质可以在整个 pH 梯度中均匀分布。在一些商品化的等电聚焦仪器中，IPG 胶条的再水化和聚焦可以用相同设备仪器完成，无需人工操作。这种仪器也可以进行所谓的主动再水化
蛋白质的双向电泳实验_等电聚焦法
蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing, IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点和分子量信息。本实验目的是
等电聚焦电泳的梯度组成
pH梯度的组成方式有二种，一种是人工pH梯度，由于其不稳定，重复性差，现已不再使用。另一种是天然pH梯度。天然pH梯度的建立是在水平板或电泳管正负极间引入等电点彼此接近的一系列两性电解质的混合物，在正极端引入酸液，如硫酸、磷酸或醋酸等，在负极端引入碱液，如氢氧化钠、氨水等。电泳开始前两性电解质的