新技术丨孟安明组建立未成熟卵母细胞原位操作新技术
基因突变与转基因技术已经成为基因功能研究、细胞谱系追踪和人类疾病建模等的重要工具。目前进行这些遗传操作通常是通过显微注射将相应的物质导入受精卵中，但是通过这种方式建立的突变体或转基因动物往往是嵌合体，若想得到稳定的杂合体或纯合体分别需要至少再传一代或两代，因此科学家一直在寻找方法对配子进行遗传操作，以降低时间和人力成本。 雌配子由于体积大，成为配子操作的首选。卵母细胞作为雌性配子，在卵巢中发育成熟。并且，卵母细胞的成熟过程十分复杂，需要多种垂体促性腺激素和性类固醇参与调节。包裹在卵母细胞周围的体细胞（如卵泡细胞和颗粒细胞等）对其成熟也是必不可少的。因此，未成熟卵母细胞的体外培养仍然是一项具有挑战性的工作。如果能够在体内对未成熟卵母细胞进行遗传操作，并使其仍在体内继续发育成熟，这将对配子遗传操作提供极大的便利。 针对上述问题，近日，清华大学生命学院孟安明院士团队在Journal of Molecular Cell Biol......阅读全文
新技术丨孟安明组建立未成熟卵母细胞原位操作新技术
基因突变与转基因技术已经成为基因功能研究、细胞谱系追踪和人类疾病建模等的重要工具。目前进行这些遗传操作通常是通过显微注射将相应的物质导入受精卵中，但是通过这种方式建立的突变体或转基因动物往往是嵌合体，若想得到稳定的杂合体或纯合体分别需要至少再传一代或两代，因此科学家一直在寻找方法对配子进行遗传操
原位PCR和原位RT-PCR操作规程
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程1、原位PCR步骤（1）预处理
原位PCR和原位RT-PCR操作规程
（一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10m
原位杂交操作规程
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2m
原位杂交操作方法
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。（二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml，NaCl 5g，浓HCl 4
原位杂交实验操作步骤
一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mllb培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的Ca
原位压力机操作规程
原位压力机操作规程：★通过加油孔加入20#液压油或20#机油1.5升；★将原位压力机各零部件组装成一个自身平衡的测力位置；★逆时针旋转泄油阀，再次拧紧四根拉力杆；★顺时针旋紧泄油阀，使压力杆加压力，加置80-100kN时，逆时针旋转泄油阀，将扁式千斤顶复原位然后顺时针旋转将泄油阀拧紧。然后检查四根样
次级卵母细胞和初级卵母细胞的区别
次级卵母细胞是初级卵母细胞经过减数第一次分裂得到的，所以次级卵母细胞内的染色体数为初级卵母细胞的一半，染色体组的数目也只有初级卵母细胞的一半，核DNA数也只有初级卵母细胞的一半。初级卵母细胞内的染色体都有单体，次级卵母细胞的前期和中期有单体,后期末期没有!人的初级卵母细胞出生时即已存在，为四倍体细胞
次级卵母细胞和初级卵母细胞的区别
次级卵母细胞是初级卵母细胞经过减数第一次分裂得到的，所以次级卵母细胞内的染色体数为初级卵母细胞的一半，染色体组的数目也只有初级卵母细胞的一半，核DNA数也只有初级卵母细胞的一半。初级卵母细胞内的染色体都有单体，次级卵母细胞的前期和中期有单体,后期末期没有!人的初级卵母细胞出生时即已存在，为四倍体细胞
直接原位PCR（In situ PCR）操作方法
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。1．组织切片和细胞样品的制备【试剂与配置】10%福尔马林二甲苯PBS【