新技术丨孟安明组建立未成熟卵母细胞原位操作新技术
基因突变与转基因技术已经成为基因功能研究、细胞谱系追踪和人类疾病建模等的重要工具。目前进行这些遗传操作通常是通过显微注射将相应的物质导入受精卵中，但是通过这种方式建立的突变体或转基因动物往往是嵌合体，若想得到稳定的杂合体或纯合体分别需要至少再传一代或两代，因此科学家一直在寻找方法对配子进行遗传操作，以降低时间和人力成本。 雌配子由于体积大，成为配子操作的首选。卵母细胞作为雌性配子，在卵巢中发育成熟。并且，卵母细胞的成熟过程十分复杂，需要多种垂体促性腺激素和性类固醇参与调节。包裹在卵母细胞周围的体细胞（如卵泡细胞和颗粒细胞等）对其成熟也是必不可少的。因此，未成熟卵母细胞的体外培养仍然是一项具有挑战性的工作。如果能够在体内对未成熟卵母细胞进行遗传操作，并使其仍在体内继续发育成熟，这将对配子遗传操作提供极大的便利。 针对上述问题，近日，清华大学生命学院孟安明院士团队在Journal of Molecular Cell Biol......阅读全文
新技术丨孟安明组建立未成熟卵母细胞原位操作新技术
基因突变与转基因技术已经成为基因功能研究、细胞谱系追踪和人类疾病建模等的重要工具。目前进行这些遗传操作通常是通过显微注射将相应的物质导入受精卵中，但是通过这种方式建立的突变体或转基因动物往往是嵌合体，若想得到稳定的杂合体或纯合体分别需要至少再传一代或两代，因此科学家一直在寻找方法对配子进行遗传操
原位PCR和原位RTPCR操作规程
（一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/L HCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10m
原位PCR和原位RTPCR操作规程
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。一、仪器设备英国Thermo Hybaid原位PCR仪。二、操作流程1、原位PCR步骤（1）预处理
原位杂交操作规程
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2m
原位杂交操作方法
（一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。（二）、试剂 0.2mol/L HCl：HCl 8.2ml，H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml，H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml，NaCl 5g，浓HCl 4
原位杂交实验操作步骤
一质粒制备1质粒的转化和扩增1.1制备XL1-Blue感受态细菌1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mllb培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的Ca
原位压力机操作规程
原位压力机操作规程：★通过加油孔加入20#液压油或20#机油1.5升；★将原位压力机各零部件组装成一个自身平衡的测力位置；★逆时针旋转泄油阀，再次拧紧四根拉力杆；★顺时针旋紧泄油阀，使压力杆加压力，加置80-100kN时，逆时针旋转泄油阀，将扁式千斤顶复原位然后顺时针旋转将泄油阀拧紧。然后检查四根样
次级卵母细胞和初级卵母细胞的区别
次级卵母细胞是初级卵母细胞经过减数第一次分裂得到的，所以次级卵母细胞内的染色体数为初级卵母细胞的一半，染色体组的数目也只有初级卵母细胞的一半，核DNA数也只有初级卵母细胞的一半。初级卵母细胞内的染色体都有单体，次级卵母细胞的前期和中期有单体,后期末期没有!人的初级卵母细胞出生时即已存在，为四倍体细胞
次级卵母细胞和初级卵母细胞的区别
次级卵母细胞是初级卵母细胞经过减数第一次分裂得到的，所以次级卵母细胞内的染色体数为初级卵母细胞的一半，染色体组的数目也只有初级卵母细胞的一半，核DNA数也只有初级卵母细胞的一半。初级卵母细胞内的染色体都有单体，次级卵母细胞的前期和中期有单体,后期末期没有!人的初级卵母细胞出生时即已存在，为四倍体细胞
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。1．组织切片和细胞样品的制备【试剂与配置】10%福尔马林二甲苯PBS【
卵母细胞的分类
初级卵母细胞 中文名称： 初级卵母细胞 英文名称：primary oocyte 定义：卵原细胞经过 有丝分裂增殖后即将进行 减数分裂的卵母细胞。 次级卵母细胞 中文名称：次级卵母细胞 英文名称：secondary oocyte 定义： 初级卵母细胞经第一次 减数分裂后产生的较大的几乎包含
原位分子杂仪的基本操作程序
材料的固定 在原位杂交中，要获得清晰完整的超微结构图像，最大限度地保持细胞内的DNA或RNA分子的完整性，使探针容易进入细胞或组织，选择合适的固定剂及固定时间对新鲜的组织迅速固定是至关重要的。 常用的固定剂如戊二醛，甲醛等交联性固定剂能较好地保持细胞和组织的超微结构，也能有效地保存组织细胞中
原位杂交技术和操作步骤详细介绍
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统
原位杂交技术和操作步骤详细介绍
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统
荧光原位杂交和用引物介导的原位标记（PRINS）操作规程
仪器设备 1、 医用微波炉； 2、 水浴锅； 3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜； 4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。FISH试剂 （1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃； （2）20×SSC（pH7.0）； （
荧光原位杂交和用引物介导的原位标记（PRINS）操作规程
仪器设备 1、 医用微波炉； 2、 水浴锅； 3、 OLYMPUS BX51荧光显微镜； 4、 OLYMPUS DP11数字显微照相机。 FISH试剂 （1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃； （2）20×SSC（pH7.0
卵母细胞的功能特点
卵母细胞(oocyte)：在卵子发生过程中进行减数分裂的卵原细胞。分为初级卵母细胞、次级卵母细胞和成熟的卵母细胞，它们分别是卵原细胞分化和DNA复制分裂后产生、第一次减数分裂和第二次减数分裂的产物。
卵母细胞的分裂形成
卵原细胞通过增殖和分化形成初级卵母细胞。一个初级卵母细胞经过减数第一次分裂形成一个次级卵母细胞和一个 极体（第一极体），次级卵母细胞减数第二次分裂形成一个 卵细胞和一个极体（第二极体），同时某些生物的第一极体也有可能进行减数第二次分裂成为两个极体，最后三个极体都死亡，只留下卵细胞。
卵母细胞的结构功能
女性排卵时，卵子从破裂的 卵泡中随卵泡液一起从 卵巢排出(排卵)，被 输卵管伞端所拾取并运送至输卵管壶腹部，等待 精子受精。这时的卵子其实是卵冠丘复合体。该复合体的中心是卵母细胞以及一个体积相对小得多的 极体，其外包裹着一层主要由卵母细胞分泌物形成的 细胞外基质，称为 透明带（简称ZP)，卵母细
卵母细胞的分类介绍
初级卵母细胞中文名称：初级卵母细胞 英文名称：primary oocyte 定义：卵原细胞经过有丝分裂增殖后即将进行减数分裂的卵母细胞。次级卵母细胞中文名称：次级卵母细胞 英文名称：secondary oocyte 定义：初级卵母细胞经第一次减数分裂后产生的较大的几乎包含全部初级卵母细胞细胞质的子细
卵泡与卵母细胞区别
卵泡是卵巢中卵子发育过程中一系列细胞和膜性结构的综合体，一个完整的卵泡包括外膜、颗粒细胞、放射冠、卵细胞等结构，而卵母细胞仅仅是一个单一的细胞，最后发育成卵子
卵母细胞的分裂形成
卵原细胞通过增殖和分化形成初级卵母细胞。一个初级卵母细胞经过减数第一次分裂形成一个次级卵母细胞和一个极体（第一极体），次级卵母细胞减数第二次分裂形成一个卵细胞和一个极体（第二极体），最后两个极体都死亡，只留下卵细胞。
卵母细胞的结构功能
女性排卵时，卵子从破裂的卵泡中随卵泡液一起从卵巢排出(排卵)，被输卵管伞端所拾取并运送至输卵管壶腹部，等待精子受精。这时的卵子其实是卵冠丘复合体。该复合体的中心是卵母细胞以及一个体积相对小得多的极体，其外包裹着一层主要由卵母细胞分泌物形成的细胞外基质，称为透明带（简称ZP)，卵母细胞与透明带之间留有
次级卵母细胞的功能特点
女性胎儿在6-7个月龄时，所有卵原细胞已全部发展为初级卵母细胞，并停留在减数分裂第一次前期双线期，一直维持到青春期排卵之前。到青春期时，由于促卵泡激素周期性刺激卵母细胞，每月成熟一个初级卵母细胞，形成次级卵母细胞，次级卵母细胞自卵巢排出，进入输卵管，在输卵管内进行减数第二次分裂达到分裂中期。此时如果
卵母细胞为何如此长寿
包括人类在内的哺乳动物在出生时就拥有所有的卵母细胞——未来会成熟为卵子。但与体内许多寿命较短的细胞不同，一些卵母细胞甚至在40多年后仍然存活且很健康。现在，两项新的小鼠研究揭示了卵母细胞长寿的可能原因，而长寿可使动物成年后保持生育能力。卵巢是卵母细胞出生的地方，其所含蛋白质的寿命几乎和动物本身一样长
卵母细胞的生理发育
从 卵巢的切面上可以看到卵巢的外层( 皮质)中有许多大大小小、代表不同 发育阶段的 卵泡(ovarian follicles)。最年幼的卵泡中央是一个较大的细胞，即 初级卵母细胞(primary oocyte)，将来发育成卵。初级卵母细胞的外面围以卵泡上皮(follicular epitheli
次级卵母细胞定义和功能
女性胎儿在6-7个月龄时，所有卵原细胞已全部发展为初级卵母细胞，并停留在减数分裂第一次前期双线期，一直维持到青春期排卵之前。到青春期时，由于促卵泡激素周期性刺激卵母细胞，每月成熟一个初级卵母细胞，形成次级卵母细胞，次级卵母细胞自卵巢排出，进入输卵管，在输卵管内进行减数第二次分裂达到分裂中期。此时如果
卵母细胞的采集和培养
⒈促排卵法（超数排卵）：用促性腺激素处理，促雌性动物排卵，从输卵管中冲取卵子⒉直接获取法：A.从已屠宰母畜的卵巢中采集卵母细胞，在体外经人工培养为成熟的卵子B.从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞，在体外经人工培养为成熟的卵子
初级卵母细胞的定义
中文名称初级卵母细胞英文名称primary oocyte定 义卵原细胞经过有丝分裂增殖后即将进行减数分裂的卵母细胞。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞分化与发育（二级学科）
初级卵母细胞的定义
中文名称初级卵母细胞英文名称primary oocyte定 义卵原细胞经过有丝分裂增殖后即将进行减数分裂的卵母细胞。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞分化与发育（二级学科）