质粒转化
[ 基本原理 ] 将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ）。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时间热冲击处理，促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培养平板上，可选出所需的转化子（即含有质粒 DNA 的细菌）。钙处理的感受态细胞，一般每微克 DNA 能获得 10 5 ～ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外，还有电穿孔法（ Electroporation ），其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。 [ 器材 ] 1 ．培养皿 2 ．恒温培养箱 [ 试剂 ] 1 ． LB 培养基 2 ．选择性 L......阅读全文
质粒转化
[ 基本原理 ] 将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化（ Transformation ）。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状（感受态细菌的制备，见前）。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时间热冲
质粒转化步骤
质粒的转化，满满干货原理：在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后，受体细胞的膜通透性发生改变，质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子，进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞：是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中，用于转化的受体菌（Restriction-
质粒转化步骤
质粒的转化，满满干货原理：在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后，受体细胞的膜通透性发生改变，质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子，进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞：是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中，用于转化的受体菌（Restriction-
质粒转化的定义
中文名称质粒转化英文名称plasmid transformation定 义将外源质粒导入原核细胞的过程。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
质粒DNA的转化
实验概要本实验将人Bcl-2重组质粒转化DH5α扩增菌，转化后在含Amp的培养基上进行筛选，生长的菌落即为含重组质粒的工程菌。含人Bcl-2重组质粒的DH5α菌用于质粒DNA的扩增，获得的质粒将作为限制性内切酶的酶切底物DNA。实验原理转化是将外源DNA分子导入到受体细胞，使之获得新的遗传特性的一种
耐药质粒DNA的转化
实验概要本实验介绍了将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。实验原理受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四
质粒的酵母直接转化
实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌
质粒－DNA－的转化实验
实验方法原理转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受体细胞一般
质粒－DNA－的转化实验
实验方法原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标，在基因克隆技术中，转化（transformation）是特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组质粒 DNA（包括人工染色体）导入细胞的过程， 是一种常用的基本实验技术。 该过程的关键是受体细胞的遗传学特性及其所处的生理状态，用于转化的受
质粒的酵母直接转化
1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振荡。PL
转化质粒浓度多少合适
100微克到500微克。
耐药质粒－DNA转化实验
耐药质粒 DNA转化实验 本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。 【原理】 受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒
质粒转化大肠杆菌
该实验主要有两个用途：1．重组质粒的鉴定。当质粒的重组或其它载体重组后，通常会发生质粒的重组失败，包括质粒的自身环化。因而要求进行筛选，把重组成功的质粒找出来。在目前常用的质粒和其它载体中含有相应的抗生素抗性基因，一旦重组成功，质粒环化（包括自身环化），抗生素抗性基因表达，被转化的大肠杆菌便具备抗相
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
rna污染是否影响质粒转化
是。质粒抽提的目的是去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其他杂质，以得到相对纯净的质粒。
哪个长度质粒转化效率最高
线性。质粒的大小和质量线性化还是超螺旋会影响转染结果，超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染，而线性化DNA的长度质粒转化效率最高。
重组质粒的电转化法
首先，将0.1cm的电击杯放在冰上进行预冷，冻存的感受态细胞取出冰上溶解。2然后，用100微升的感受态细胞加入1微升纯化的连接液，或者加入0.5微升未纯化的连接液，小心混匀，在冰上放置二十分钟。3然后，将混合液加入预冷的电击杯中，注意擦干杯外的水，防止电火花，放入电转化仪的反应槽内，接上电源。4然后
重组质粒的连接、转化及筛选
实验材料 外源DNA 片段试剂、试剂盒 连接反应缓冲液T4 DNA 连接酶X-gal储液IPTG储液麦康凯选择性培养基仪器、耗材 恒温摇床台式高速离心机恒温水浴锅电泳装置电热恒温培养箱电泳仪移液枪eppendorf管
酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PL
重组质粒的连接、转化及筛选
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化，于体外使两者相连接(若用T-载体，可直接用纯化的PCR产物进行连接)，转化宿主细菌后，利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
重组质粒的连接、转化及筛选
实验概要本技术以pBS质粒、E. coli DH5α为例介绍了重组质粒的连接、转化及筛选。实验原理本实验所使用的载体质粒DNA为pBS，转化受体菌为E.coli DH5α菌株。由于pBS上带有Ampr 和lacZ基因，故重组子的筛选采用Amp抗性筛选与α-互补现象筛选相结合的方法。因pBS带有Amp
重组质粒的转化、筛选和鉴定
一、实验目的1、学习克隆工作中最常用的双酶切；2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术；3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术；4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。6、学习鉴定重组子的方法。二、 实验原理重组子的建立
重组质粒的连接、转化及筛选
第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可
重组质粒的连接、转化及筛选
第一节 概 述质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实
重组质粒的连接、转化及筛选
材料、设备及试剂 一、 材料 外源DNA片段: 自行制备的带限制性末端的DNA溶液,浓度已知; 载体DNA: T-vector(Ampr ,lacZ),自行提取纯化,浓度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互补能力的菌株。 二、 设备 恒温摇床，台式高速离心机，恒
重组质粒的连接、转化及筛选
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化，于体外使两者相连接(若用T-载体，可直接用纯化的PCR产物进行连接)，转化宿主细菌后，利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
质粒DNA的转化和染色体DNA的转化差异
质粒DNA的转化和染色体DNA的转化有显著的不同。在一般情况下前者的转化效率远远低于后者。但如果先用一定浓度的钙离子处理大肠杆菌细胞，再用质粒DNA和染色体DNA对它做转化实验则情况恰好相反。此外，质粒DNA很容易进入去掉了细胞壁的细菌的原生质体，说明对它的吸收并不通过专门的接受位点；质粒DNA的转
质粒的转化及转化子的鉴定实验——热激法
质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作（1）用于基因的克隆增殖；（2）筛选目的细胞。实验方法原理热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸
质粒DNA高频转化大肠杆菌实验
实验材料 感受态细胞试剂、试剂盒 质粒DNA抗生素仪器、耗材 Ep管水浴锅LB平板实验步骤 1、取新制备的一管感受态细胞。 2、取0．03 ml感受态细胞转和4 ng质粒DNA混匀，置冰浴30min 3、将 Ep管置于42 ℃水浴中热冲击2分钟，立即置于冰上1分钟。 4、在 Ep管中加70 ul L