rna污染是否影响质粒转化

是。质粒抽提的目的是去除RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,去除蛋白质及其他杂质,以得到相对纯净的质粒。......阅读全文

如何防止RNA酶污染

在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所

防止RNA酶污染方法

防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用)。3. 有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在3% H2O2 室温10mi

RNA-酚污染-怎么避免

如果是酚污染:加200氯仿抽提离心得到上清后再加等体积的氯仿(400-500)抽提一次。 问题是不知道是不是酚污染而造成在270吸光值.....西瓜(站内联系TA)加了氯仿抽提之后,吸上清不要贪多。RNA要的是纯度,浓度一般不成问题。碰到下层就会有酚的污染。 再有就是用酒精漂洗的时候,尽量让沉淀块整

rna污染是否影响质粒转化

是。质粒抽提的目的是去除RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,去除蛋白质及其他杂质,以得到相对纯净的质粒。

防止RNA酶污染的措施

在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所

避免RNA酶污染的方法

RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA,必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法,最大限度

提质粒后有RNA污染,可以加点RNA酶处理吗

实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了:1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。无论是小提还是大提我们都是用的日常型

RNA酶污染的预防措施

RNA的的化学性质比DNA活跃得多。RNA分子上紧邻磷酸二脂键的2′羟基基团能直接被RNA酶利用来作为活性因子,从而使得RNases无需金属离子就能发挥活性。由于RNA酶在环境中广泛存在,特别是RNase A,结构极其稳定,不能通过高温高压灭菌失活,因而极难消除,对保持RNA样品的完整性构成极大

如何说明DNA提取中有RNA污染

测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明

如何说明DNA提取中有RNA污染

测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明

核糖体RNA污染怎么回事

核糖体RNA是rRNA。解析:核糖体的英文是ribosome,取首字母r和RNA组成rRNA,即核糖体RNA。mRNA是信使RNA:messenger RNA

质粒中有RNA污染,会不会影响转染

实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒,转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了:1,注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染,收集菌体沉淀时防止菌液散落,经常用75%的乙醇擦拭手套。2,最后洗脱时最好使用无内毒素的水,我们是用注射用水的。无论是小提还是大提我们都是用的日常型

提取RNA时如何去除DNA的污染

提取RNA时如何去除DNA的污染的方法:注意实验室的标准化问题,注意污染的存在,同时严格按照说明书上的操作应该没有问题。发现DNA污染,用DNAse I 消化1小时,37度离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于

提取RNA的时候总是有DNA污染

不管RNA还是RT之后做pcr,RNA都要变成cDNA之后才能做pcr。确定用DNase I处理过,电泳没有DNA条带了。一般RT用oligo dt或者随机引物做扩增。也有用你想的目的片段的扩增引物做RT的。你看看你现在用的是什么引物,换oligo试试,不行换成你的基因特异性引物做了RT之后,再来p

RNA提取过程中如何去除DNA污染

方法:1、使用DNA酶DNAse I 消化1小时,恒温37度。2、离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。3、直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。

提取的DNA中含有蛋白质和RNA污染

提取的时候饱和酚,氯仿需要定量,这些可以去蛋白。去除RNA污染,RNA酶活性,定量。凝胶电泳,试剂最好是即用型的,因为有些东西放久了会长菌。然后是染料的热稳定性和灵敏度。

在抽提RNA时,有色素污染,怎样去除色

用Trizol法沉淀RNA容易有一些杂质的。部分色素是会和RNA一起沉下来。这种情况可以用75%冷的乙醇多洗几遍。对后续qRT-PCR多数情况下没什么影响。另外可以用硅胶柱法纯化RNA,色素残留会少一些。RNase 污染的10大来源1:手指头 – 手指头是外源酶的第一来源,所以必需戴手套并且频繁更换

Realtime-PCR实验注意事项(防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...1

实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱,切记切记 多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是最快提高的捷径了 所有的试剂都自己配

Realtime-PCR实验注意事项(防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...2

[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套,并尽可能在低温下操作。另外,提取上清这步一定要小心,靠近沉淀的部分一定要舍得不要,要不然会有蛋白质污染,影响比值2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年。总mRNA的提取(自己的经验)一、关

Realtime-PCR实验注意事项(防RNA酶污染和常用RNA酶抑制...3

DEPC处理方法如下:1.DEPC处理(1)DEPC水:100ml超纯水加入0.2ml DEPC,充分混匀,高压灭菌。(2)Tip头(枪头)、EP管等在提RNA过程中及做RT时接触RNA的器材(包括1ml、200μl、20μl Tip头;EP管和PCR反应管等):用0.1%的DEPC水(1000 m

提取的基因组DNA有RNA-污染如何解决?

得到的基因组在进行常规下游实验如,PCR、酶切、分子杂交等生物学实验时如不能顺利进行,主要因为DNA 样品不纯,含有蛋白、有机溶剂和盐类等杂质影响内切酶或DNA 聚合酶的活性。 1)实验过程中没有有效使用RNase A,应严格按照实验要求进行。 2)RNase A失活: RNase A应

研究发现空气污染诱发肺癌关键长链非编码RNA

  中科院动物所周光飚研究组通过深入研究,发现了空气污染诱发肺癌的关键长链非编码RNA。相关成果日前发表于肿瘤学杂志Oncotarge。  据了解,肺癌已成为全球发病率最高、致死人数最多的癌症,其中90%的肺癌由吸烟、空气污染等环境因素引起。然而,空气污染诱发肺癌的分子机制目前尚不清楚。  此前研究

怎么样在RNA提取时避免基因组的污染

260/280的比值可以判断比较严重的基因组污染。也可以通过跑琼脂糖胶看加样孔里亮不亮作为一个参考依据。其实一般很难保证RNA没有基因组污染的,特别是加入氯仿后的剧烈震荡会促进dna溶解到水相里,后面就很难分离了。有些许的基因组污染的样品也能够满足大部分的实验要求。所以在rt-pcr等试验中才要求设

如何使用KeyPro污染净化仪防止RNA的降解和保证PCR的结果...

如何使用KeyPro污染净化仪防止RNA的降解和保证PCR的结果准确性在此次的新型冠状病毒疫情中,核酸检测作为确诊的金标准发挥着重要的作用。众所周知,本次新冠病毒的核酸检测流程为采样(咽拭子、肺泡灌洗液),提取病毒RNA,再经过RT-qPCR或者一步法RT-数字PCR检测样本。但近期关于核酸检测准确

RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(2)

早期的 RNAi 技术可用在研究与胚胎发育相关基因的功能上,但是由于细胞分裂造成 dsRNA 的稀释,使得这种方法在研究成体的基因功能时有一定的局限性。为弥补早期 RNAi 技术的不足,Tavernarakis 等将 RNAi 技术做了一些改进及更动,将目的基因之标的序列以反向重复的方式,由

RNA干扰技术(RNA-interference,RNAi)

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果

RNA干涉(RNA-Interference,RNAi)(1)

基因沉默(gene silencing)是生物体内特定基因由于种种原因不表达的遗传现象。一方面,基因沉默是生物遗传操作创造新的遗传修饰生物(genetically modified organisms)的障碍,另一方面,它又是植物抵抗外来核酸入侵(如病毒)的一种反应,为植物抗病毒的遗传育

RNA提取时RNA降解原因

1 ) 新鲜细胞: 裂解液的量不足,使得裂解不充分。 2 ) 新鲜组织: 某些含有内源性核酸酶的样品,很难避免RNA酶的降解,建议采用的方法为在液氮条件下将组织研碎,并且,匀浆时采用更多的裂解液。 3 ) 冷冻样品: 样品取材后应该迅速置于液氮中冷冻存放,然后转移到-70℃冰箱存

RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后

RNA干扰相关知识RNARITS)

RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing(RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。