引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的长度为引物的标记的核苷酸到RNA-5`末端间的碱基数，所得cDNA的量和目的RNA的起始量成正比。理想的引物是ssDNA, 长度为20-40个核苷酸，与要分析的转录产物的5`末端区域互补。延伸产物小于150个核苷酸，可得到最佳分离效果。引物延伸实验非常灵敏，可检测2pg的转录产物，这相当于1个细胞中的1个RNA。引物延伸实验非常适合于对单个基因作定量和定性分析。2)作这样一个实验必须用什么试剂？引物延伸实验需要模板RNA，可用总RNA或poly(A)+RNA。一个特异的末端标记的核苷酸或DNA片段作为引物，用反转录酶合成cDNA。除R......阅读全文
引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的
引物延伸实验
引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交，RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量，基因产品的数量是针对性的RN
引物延伸实验
实验材料 RNA 试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶 dATP 醋酸钠 乙醇
引物延伸实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶dATP醋酸钠乙醇EDTARNaseA苯酚氯仿仪器、耗材 恒温培养箱NAP-5柱-70°C冰箱低温离心机实验步骤 1. 依次加入下列试剂，建立用以标记引物的反应混合液（终体积10 μl）（1）2.5 μl H2O（2）1 μl 10×T4多核苷酸激
引物延伸反应
Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5´-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide i
EMSA实验问题与解答
以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互
引物延伸法 RNA 分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶 AMV 反转录酶 酵母 tRNA 试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液
引物延伸法 RNA 分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶AMV 反转录酶酵母 tRNA试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液 5X 杂交缓冲溶液 Tris-HCl MgCl2 DTT 放线菌酮 D dNTP RNasin 甲酰胺上样染液 SephadexG-25 NaAc 乙醇 [r-32P]ATP仪器、耗材 水浴 杂交炉 电泳设备
5.6 引物延伸法 RNA 分析
引物延伸法可用于 RNA 的作图和 RNA5＇端的定暈。在此方法中，将过量的 5＇端标记的单链 RNA 引物与待测的 RNA 杂交，随后用反转录酶延伸该引物，生成句 RNA 模板互补的 cDNA。再在变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 cDNA 的长度，即可确定 RNA 端的位置，并且 cDNA
引物延伸分析（primer extension analysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR