引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的长度为引物的标记的核苷酸到RNA-5`末端间的碱基数，所得cDNA的量和目的RNA的起始量成正比。理想的引物是ssDNA, 长度为20-40个核苷酸，与要分析的转录产物的5`末端区域互补。延伸产物小于150个核苷酸，可得到最佳分离效果。引物延伸实验非常灵敏，可检测2pg的转录产物，这相当于1个细胞中的1个RNA。引物延伸实验非常适合于对单个基因作定量和定性分析。2)作这样一个实验必须用什么试剂？引物延伸实验需要模板RNA，可用总RNA或poly(A)+RNA。一个特异的末端标记的核苷酸或DNA片段作为引物，用反转录酶合成cDNA。除R......阅读全文
引物延伸实验问题与解答
1)什么是引物延伸实验？引物延伸实验用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域， 随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA。cDNA的
引物延伸实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶dATP醋酸钠乙醇EDTARNaseA苯酚氯仿仪器、耗材 恒温培养箱NAP-5柱-70°C冰箱低温离心机实验步骤 1. 依次加入下列试剂，建立用以标记引物的反应混合液（终体积10 μl）（1）2.5 μl H2O（2）1 μl 10×T4多核苷酸激
引物延伸实验
实验材料 RNA 试剂、试剂盒 T4多核苷酸激酶 dATP 醋酸钠 乙醇
引物延伸实验
引物延伸分析用于确定位置和定量特定RNA的5'-端的数量。结束标记的寡核苷酸杂交，RNA和利用中存在的脱氧核苷酸逆转录作为底漆。因此RNA的反转录成cDNA，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。cDNA的长度反映了基地之间的标记引物和RNA的5'-端核苷酸的数量，基因产品的数量是针对性的RN
EMSA实验问题与解答
以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互
引物延伸反应
Primer extension analysis is used to determine the location and quantitate the amount of the 5´-end of specific RNAs. An end-labeled oligonucleotide i
引物延伸的概念
中文名称引物延伸英文名称primer extension定 义从与模板(RNA或DNA)结合的引物3′-OH端开始，在核酸聚合酶的作用下，按照碱基配对的原则，逐个连上核苷酸，由5′→3′方向合成与模板互补链的过程。该反应可用于聚合酶链反应、单核苷酸多态性检测等。应用学科生物化学与分子生物学（一级学
引物延伸法－RNA－分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶 AMV 反转录酶 酵母 tRNA 试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液
引物延伸法－RNA－分析
实验材料 T4 多核苷酸激酶AMV 反转录酶酵母 tRNA试剂、试剂盒 10X 激酶缓冲液 5X 杂交缓冲溶液 Tris-HCl MgCl2 DTT 放线菌酮 D dNTP RNasin 甲酰胺上样染液 SephadexG-25 NaAc 乙醇 [r-32P]ATP仪器、耗材 水浴 杂交炉 电泳设备
什么是引物延伸分析？
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
5.6－引物延伸法－RNA－分析
引物延伸法可用于 RNA 的作图和 RNA5＇端的定暈。在此方法中，将过量的 5＇端标记的单链 RNA 引物与待测的 RNA 杂交，随后用反转录酶延伸该引物，生成句 RNA 模板互补的 cDNA。再在变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 cDNA 的长度，即可确定 RNA 端的位置，并且 cDNA
引物延伸分析（primer－extension－analysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mRN
引物延伸分析（primer－extension－analysis）
引物延伸分析（primer extension analysis）主要用于mRNA 5′端作图。poly（A）+RNA首先与过量5′端标记的且与靶RNA互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的cDNA与RNA模板互补且长度与引物5′端和RNA 5′端之间的距离相等。该法在mR
RNA制备的问题与解答
1、塑料制品、玻璃和金属物品的处理(a)塑料制品：尽可能使用无菌，一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过，通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理方法如下：(1)在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意：
用引物延伸法进行－RNA－的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且
用引物延伸法进行－RNA－的分析
引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之间的距离相
用引物延伸法进行－RNA－的分析
实验方法原理 引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) + RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5'
SWATH技术常见问题与解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是苏黎世联邦理工学院及AB SCIEX（全球领先的生命科学分析技术公司）的科学家联合推出的一项基于质谱应用的新技术。利用此项技术，科学家有史以来首次
移液器常见问题与解答大全
移液器是实验室里面最长使用的实验仪器之一，基本上每一个实验室人员都曾经或现在使用过移液器，因而也会遇到移液器使用时的一些问题。笔者总结归纳了移液器使用时常见的问题与解答大全，希望对于大家有所帮助：移液器使用时常见的问题与解答大全：问题可能原因提议移液器渗漏多道移液器吸嘴里不均衡的液体水平·吸嘴与移液
SWATH技术常见问题与解答
SWATH（Sequential Window Acquisition of all THeoretical Mass Spectra）采集模式是苏黎世联邦理工学院及AB SCIEX（全球领先的生命科学分析技术公司）的科学家联合推出的一项基于质谱应用的新技术。利用此项技术，科学家有史以来首次可
浓缩仪常见问题与解答
1、样品浓缩仪与氮吹仪的区别？答：样品浓缩和氮吹仪都是用氮气来进行吹扫，只是各厂家的命名不一样。2、如何能让实验速度更快、效率更高？答：样品浓缩仪的原理是通过提高样品的温度，使样品的溶剂在无氧状态下进行挥发，从而快捷高效的达到浓缩的目的。影响实验速度的原因有两个：1）加热的温度。2）气体的流量及气体
使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型实验1
单重 PCR 的引物延伸法实验材料目的基因组DNA试剂、试剂盒10 X PCR 缓冲液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶SNP 引物仪器、耗材384孔黑色 PCR 板多管移液器或液体操作工作站384孔 PCR 板封口垫带加热盖的热循环仪FP 读板设备实验步骤展开
使用引物延伸荧光偏振探测法的高通量基因分型实验2
四重 PCR 的引物延伸法实验材料目的基因组DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液Taq DNA 聚合酶4dNTP 混合液PCR 引物混合液AcydoTerminator混合液仪器、耗材384孔透明 PCR 板和黑色 PCR 板多管移液器或液体操作工作站384孔 PCR 板封口垫带加热盖的热循环
实验常见问题解答汇集
BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，无法确定甲基化的程度，必需通过回收PCR产物，进
eBioscience流式抗体常见问题与解答
1、eBioscience公司提供了哪些抗体？ A：物种——人、小鼠、大鼠、非人灵长类、犬类等。检测指标——包括细胞表面标记（CD分子，膜骨架，趋化因子受体）和胞内指标（细胞因子，核内转录因子）。抗体标记——生物素标记抗体，亲和纯化抗体以及直标荧光素抗体。eB抗体的直标荧光素有（括号内是发射光波长
测序过程常见问题分析与解答
DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答：溶解DNA测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应,需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后,在进行了测序反应时,DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件,造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客户在
实验常见问题解答汇集(一)
实验常见问题解答汇集(一) BSP甲基化扩增得到的PCR产物可否直接测序，为什么需要构建TA克隆后测序？ 由于基因组DNA的每个CG位点甲基化程度各不相同，未发生甲基化的C会被重亚硫酸盐修饰成为U，而C若发生甲基化则不变，这样如果进行PCR产物测序就有可能在原有的C位点得到双峰图，
细胞培养常见问题与解答4
22.在High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少？ High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。 23.High Five细胞用多大的密度冻存？ 3.0x10E6 ce
细胞培养常见问题与解答1
1.为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。2.如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0
细胞培养常见问题与解答2
8.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。9.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀？GIBICO的胎牛血清 没有预老化，储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白