植物细胞线粒体DNA的提取

实验方法原理分离线粒体DNA和叶绿体DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分离完整的细胞器,然后从细胞器中提取DNA。要获得高纯度的细胞器DNA,关键是要把所要的细胞器与其他亚细胞结构分离开来,这可以通过差速离心或梯度离心来完成。完整的细胞器经裂解后,可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。在裂解细胞器之前常用DNase清除非细胞器的DNA。本实验采用匀浆法先将线粒体从细胞中分离出来,再使线粒体发生裂解,释放出DNA、蛋白质等,经酚抽提后即可得到提纯的mtDNA。实验材料植物幼嫩叶片仪器、耗材研钵(直径12cm)和研棒冷冻离心机(SorvallBeckman等)微型离心机(1.5ml管)-20℃冰箱恒温水浴锅实验步骤以下所有操作除特别指明外,均在4℃进行,将研钵、研棒和离心管预冷,使用冷藏的缓冲液并在冰桶中操作。1.剪取幼嫩叶片,用1%次氯酸钠溶液消毒15min,无菌水冲洗3次,再将其剪成约1cm2的碎片。2.按每克材料1......阅读全文

植物细胞线粒体DNA的提取

实验方法原理分离线粒体DNA和叶绿体DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分离完整的细胞器,然后从细胞器中提取DNA。要获得高纯度的细胞器DNA,关键是要把所要的细胞器与其他亚细胞结构分离开来,这可以通过差速离心或梯度离心来完成。完整的细胞器经裂解后,可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。在

植物细胞线粒体DNA的提取

实验方法原理 分离线粒体DNA和叶绿体DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分离完整的细胞器,然后从细胞器中提取DNA。要获得高纯度的细胞器DNA,关键是要把所要的细胞器与其他亚细胞结构分离开来,这可以通过差速离心或梯度离心来完成。完整的细胞器经裂解后,可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。

如何提取细胞线粒体

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案:心肌组织切碎后在4 ℃介质(0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4,0-4℃)中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清,以9000 g离心20 min 后留沉淀,重新悬浮后以9000 g再离心20 min,弃

植物DNA提取实验

机械法             实验方法原理 这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破

植物DNA提取原理

通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用。十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三

植物DNA提取实验

实验方法原理 真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步,首先是机械法破细胞抽提;然后去除蛋白质,糖类等细胞内杂质污染;最后纯化出DNA。实验材料 幼嫩的植物材料试剂、试剂盒 液氮CTAB抽提缓冲液NaACTris-HCl EDTA氯仿异戊醇TE buffer仪器、耗材 瓷研钵离心管离心机实验步骤 一

如何提取细胞中的线粒体

看你的目的,是要分离线粒体蛋白(不需要线粒体有活性),还是要做线粒体功能?但是方法一般是把细胞磨碎(有特殊的匀浆器),然后密度梯度离心。如果需要纯度很高,那还要超速离心。需要提醒的就是,这样提取线粒体需要大量,大量的细胞。说明书上说,如Hela,要1-2ml。。。。就是说细胞离下来,得有1-2个ml

植物DNA提取中怎样检测提取到DNA质量

第一种方法是测量260/280的比例,判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收,A260与A280之比应在1.75-1.80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚,高于此值表明有RNA的残留。第二种方法是凝胶电泳分析,看有无断裂降解。影响DNA提取质量的

细胞化学词汇线粒体DNA

中文名称:线粒体DNA外文名称:Mitochondrial DNA,mtDNA定       义:线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。 

细胞化学基础线粒体DNA

线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。它们携带着自己的DNA——mtDNA,而这些基因的突变能引起线粒体疾病。虽然疾病症状是多变的,但大脑、肌肉和心脏

CTAB法提取植物总DNA

实验概要CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,通过实验掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。 实验原理CTAB  (hexadecyltrimethylammonium  bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特

植物DNA提取实验——机械法

植物DNA提取实验用于:(1)获得较纯的真核细胞基因组DNA;(2)后续PCR分析,RFLP分析,基因文库的构建,基因探测等的研究。实验方法原理这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破裂。同时将核酸与植物

植物组织中DNA的提取与测定

一、原理 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。D

植物总DNA提取方法和过程

植物总DNA提取植物总 DNA 的提取有多种方法,转基因食品检测中不同用途的 DNA 提取应该采用各自适宜的方法进行。下面介绍用于新鲜或干燥的植物性食品检测的常见 DNA 提取方法。1、可用于 PCR 的粗提液微量制备1)原理与特点利用搅拌破碎食品组织,碱液破坏细胞壁然后再用缓冲液进行提取。此法主要

病毒-DNA-的提取实验——培养细胞中病毒-DNA-的提取

实验材料细胞试剂、试剂盒裂解液TE 缓冲液仪器、耗材培养瓶EP管真空泵实验步骤1. 贴壁培养细胞倾去培养液,加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中,2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液,用 PBS 悬浮细胞,离心洗涤 2~3次,用 PBS

癌细胞线粒体DNA漂移的分子机理

  通过对57例结肠癌患者的基因组进行基因分析,研究人员发现患者体细胞核内的平均线粒体DNA数量比健康人高4.42倍。“这表明,迁移到核基因组中的线粒体DNA可能对癌症的发展起重要作用,”本文的共同作者,来自UAB公共卫生学院的生物统计学教授Hemant K. Tiwari博士和UAB医学院遗传学教

细胞化学基础线粒体DNA组成结构

研究人员发明了转换卵细胞基因材料的方法,用拥有健康线粒体的卵细胞取代携带错误线粒体DNA的卵细胞。结果是,胚胎会携带来自母亲和父亲的核DNA,以及卵细胞捐献者的线粒体DNA。mtDNA虽能合成蛋白质,但其种类十分有限。迄今已知,mtDNA编码的RNA和多肽有:线粒体核糖体中2种rRNA(12S及16

病毒-DNA-的提取实验——全血细胞中病毒-DNA-的提取

实验材料全血试剂、试剂盒裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材离心机水浴锅实验步骤1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀, 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀,再重复离心 1次,弃上清液。3. 用 117µL

粗提取植物DNA的实验步骤和原理

提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分

线粒体DNA的定义

线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。

线粒体DNA的特性

线粒体DNA是线粒体中的遗传物质,线粒体能为细胞产生能量(ATP),是在细胞线粒体内发现的脱氧核糖核酸特殊形态。线粒体是为细胞提供能量(ATP)的细胞器。一个线粒体中一般有多个DNA分子。

SDS法提取植物基因组DNA

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后,加入高浓度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀。一 材料、试剂和仪器1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料2 试剂(1)提取缓冲液Tris-H

细胞化学基础线粒体DNA基本性质

与核基因组相比,线粒体基因组有如下性质:所有的基因都位于一个单一的环状DNA分子上。遗传物质不为核膜所包被。DNA不为蛋白质所压缩。基因组没有包含那么多非编码区域(调控区域或“内含子”)。一些密码子与通用密码子不同。相反,与一些紫色非硫细菌相似。一些碱基为两个不同基因的一部分(重叠基因):某碱基作为

线粒体的提取与观察

线粒体是细胞中重要的细胞器,存在于绝大多数生活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。正由于这样,对线粒体膜,呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构,功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题,所以提取线粒体的技术已经成为线粒体研究中必不可少的手段,线粒体大量存在于代

线粒体的提取与观察

线粒体是细胞中重要的细胞器,存在于绝大多数生活细胞中,它的主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。正由于这样,对线粒体膜,呼吸链酶及线粒体DNA等成分的结构,功能以及物理化学性质的研究已经成为细胞生物学研究中的重要课题,所以提取线粒体的技术已经成为线粒体研究中必不可少的手段,线粒体大量存在于代

如何从细胞中提取dna

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行SDS十二烷基磺酸钠:可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~具体忘了~DNA不溶于异丙醇,异丙醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了以下

一种简单实用的提取植物DNA实验

实验方法原理的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法。此方法最大的特点是:将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接被

一种简单实用的提取植物DNA实验

实验方法原理的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法。此方法最大的特点是:将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接被

一种简单实用的提取植物DNA实验

实验方法原理 的提取是植物分子生物学和基因工程研究的一种基本的技术,至今已有了数种方法。此方法最大的特点是:将SDS同时用作细胞膜的去污剂和蛋白质的变性剂,变性的蛋白质通过离心而不是酚抽提除去,使得整个操作过程变得简单快捷,比较温和,1小时左右就可以获得纯化的植物DNA。用这种方法得到的DNA能直接

植物DNA的提取与定量分析实验

实验方法原理幼嫩组织的细胞处于旺盛的分裂阶段,细胞核较大而细胞质较少,核酸浓度高,且内含物少,次生代谢产物少,蛋白质及多糖类物质相对较少,在SDS或CTAB物质存在时,经机械研磨,使细胞破裂释放出内含物,提取的DNA、RNA的产量高,纯度好。提取DNA所用的提取液、吸头、离心管等需要高压灭菌以灭活D