用肽适配体正向分析细胞过程实验1
实验材料用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材30℃ 培养箱实验步骤1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛选株（106～107 转化株）。将转化株涂布到 10 cm Glu/CM-Trp 平板上并于 30℃ 培养至克隆直径为 1 mm （2～3 天）。2. 收集酵母细胞，测定平板效率。3. 接种 10 个库等价物到 1 ml Gal/Raf/CM-Trp 液体培养基中。于 30℃ 振荡培养 4 h。4. 室温下，于 3000 g 离心 4 min。吸去上清，将酵母沉淀重悬于无菌水中。5. 将酵母涂布到 10 cm Gal/Raf/CM-Trp 筛选平板上并于选择条件下培养。6. 将阳性克隆划线接种到 Glu/CM-Trp 主平板上。7. 将主平板复印到 Glu/CM-Trp 和 Gal/Raf/......阅读全文
用肽适配体正向分析细胞过程实验1
实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库 试剂、试剂盒 完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板 仪器、耗材 30℃ 培养箱 实验步骤 1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛
用肽适配体正向分析细胞过程实验
实验方法原理 实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒 完全极限（CM） 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材 30℃ 培养箱实验步骤 1. 用高效乙酸锂转化法将 50～100 ug 肽适配体库（在 pJM-2 或 pJM-3 中）转化酵母筛选株（106～107 转化株）。将转化株涂布到
用肽适配体正向分析细胞过程实验2
辅助方案 肽适配体靶点的鉴定 实验方法原理 通过配对相互作用或捕获法鉴定的肽适配体的假定靶点应当通过遗传学测试进行验 证，例如： 1. 用免疫沉淀法确定体内适配体的相互作用； 2. 通过上位（显）性分析以确定适配体在与靶蛋白相同的区域发挥功能； 3. 比较由靶蛋白删除或过表
构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验
实验材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液 试剂、试剂盒 DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶（CIP）限制性内切核酸酶反应缓冲液4dNTPTris·Cl培养基 仪器、耗材 QIAquick 胶回收试剂盒
构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验
实验方法原理 实验材料 E.coli MC 1061 （Bio－Rad）硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒 DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶（CIP）限制性内切核酸酶反应缓冲液 4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材 QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合
肽适配体的亲和力成熟实验
实验材料质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒Taq 聚合酶10×缓冲液引物dATPdGTPdCTPdTTPMgCl2MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器30℃ 培养箱实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 制备
肽适配体的亲和力成熟实验
实验方法原理 实验材料 质粒 DNA酵母株试剂、试剂盒 Taq 聚合酶10×缓冲液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板Xgal 平板仪器、耗材 PCR 管PCR 纯化柱自动热循环器 30℃ 培养箱实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「
抗肽抗体的制备实验1
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中，置于一个2 ml 的玻璃试管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室温下温和搅拌30 min。 2. 加
用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验1
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ试剂、试剂盒酪氨酸激酶分析缓冲液酪蛋白激酶肽底物溶液实验步骤1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物：5X 酪氨酸激酶分析缓冲液 10 μl10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液 5
利用双杂交系统相互作用阱／筛选特定蛋白肽适配体实验
实验材料DNA酵母株试剂、试剂盒PCR 引物聚乙二醇甘油存储液Tris·ClX-gal 平板完全极限（CM） 缺失成分培养基和平板仪器、耗材30℃ 和 42℃ 培养箱或水浴实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 使用标准的亚克隆技术，将编码诱饵蛋白的 DNA 插入 PEG20