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常用试剂的性质与制备纯化(四)

21.钾在处理钾时必须非常小心,要在装有石油醚的研钵中切金属钾,不要用易碎的烧杯或培养皿。切开外面的氧化层,然后用镊子将碎屑放入另一装有石油醚的研钵中。用镊子将刚切的钾夹到滤纸上,快速吸干,然后加到已知质量的装有石油醚的烧杯中,称量。将称量后的钾加到反应物中。钾碎屑不应久置,应立即分解掉,可将装有钾碎屑的研钵转移到通风橱内,用移液管分批加入少量叔丁醇(不能用甲醇或乙醇),控制滴加速度使反应不是很剧烈。准备一个防热挡板,如果溶液着火,可用挡板盖住熄灭。粘在刀上和研钵中的钾屑也要在通风橱中用叔丁醇小心处理。 22.甲醛商品福尔马林是含37~40% 甲醛的水溶液(每毫升含甲醛0.37~0.40 g),加入12%的甲醇作稳定剂。当需要干燥的气态甲醛时,可通过180~200℃多聚甲醛的解聚得到。23.金属氢化物金属氢化物应用广泛,处理简单,常被选作很多有机官能团的还原剂。下面几种金属氢化物的氘代物可以通过商业途径得到,它们能在有机化合物的......阅读全文

常用试剂的性质与制备纯化

常用试剂的性质与制备纯化有机化学实验经常用到大量的试剂,包括无机试剂和有机试剂,市售的试剂有分析纯(A.R)、化学纯(C.P)、工业级(T.P)等级别,其中分析纯的纯度较高,工业级则带有较多的杂质。在某些有机反应中,对试剂或溶剂的要求较高,即使微量的杂质或水分的存在,也会对反应的速率、产率和产品纯度

常见有机溶剂的纯化方法总结

  在实验室里是不是常碰到这种情况:做某个实验,用不同品牌甚至同一品牌不同批次的试剂,能做出完全不同的结果,然后买了纯度更高的试剂回来做,结果就是正常的了……  化学供应商提供的常用试剂仅可满足一般化学反应的需要。为了确保一些有机合成反应的顺利进行,常常要对试剂进行进一步的纯化处理。常用的溶剂处理方

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

我国目前针对实验室化学试剂纯度的分级

  目前,我国的化学试剂己广泛应用于工业、农业、医疗卫生、生命科学、生物技术、环境保护、能源开发等科研领域和国民经济发展的各个行业,其化学试剂按纯度分为以下几个等级:优级纯(GR,标签颜色为深绿色)、分析纯(AR,标签颜色为红色)、化学纯(CP,标签颜色为蓝色)和四级试剂(实验或工业试剂)通常用L.

核酸分离与纯化的设计与原则

细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些

直接点样的芯片制备技术

    直接点样法最早由Stanford大学Brown实验室发展而来,是将微量的寡聚核苷酸片段、cDNA或蛋白质等通过特定的高速点样机器人直接排列到玻片等介质上,生物大分子探针通过共价键或离子键与特殊处理的玻片相连,从而制备成芯片。直接点样法主要包括3个重要的环节:探针

蛋白质组学的样品制备

想要研究蛋白质,首先要得到高度纯化且具有生物活性的目的物质,因此,蛋白样品的制备是重要前提。蛋白提取的质量和效果对后续的研究分析有重要影响。不同种类的样本在制备过程中,存在一些差异,要根据样本特征调整实验方案和操作细节。基本原则样品处理尽量简单,减少蛋白损失;尽量避免蛋白的降解;尽可能提高样品蛋白的

免疫酶细胞化学实验技术-3

一、对照实验  1.吸收实验  应用尚无文献报告的抗血清/自己制备的抗血清进行ICC染色时,需用相应的抗原吸收抗血清后,再孵育标本,判断结果的可信性(结果应为阴性)。常用的吸收实验分固相吸收和液相吸收两种(见本书第一章 ),对于不能形成沉淀,难以用离心沉降法分离的一些小分子多肽类抗原,以固相吸收为佳

放射性碘标记

在RIA中,标记抗原质量的优劣,直接影响测定结果,必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原,并保持免疫活性不受丧失。  一、同位素的选择  同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量,这种测量较灵敏而方便,故多用放射性同位素。标记抗原,常用的放射性同位素有3H、14C、1

蛋白质与多肽激素的放射免疫分析-2

(二)乳过氧化物酶法(LPO)  本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。  1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。  2.方法

基于微流控芯片的固相萃取技术简介

目前,国内外针对微流控芯片上样品的前处理的方法和技术研究越来越多,最主要的技术有过滤、膜分离、液-液萃取、固相萃取、等速电泳和场放大堆积等。这些方法各有特色和优势,有的兼具样品提取和富集的功能。特别是固相萃取技术,其富集倍数甚至可达10^5,超过某些专门的样品富集技术。与其他前处理方法相比,固相萃取

免疫酶细胞化学实验技术

免疫酶细胞化学免疫酶细胞化学是免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)中最常用的方法之一,它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下,借助于酶细胞化学的手段,检测某种物质(抗原/抗体)在组织细胞内存在部位的一门新技术:即预先将抗体与酶连结,再使其与组织内特异抗原反应,经细胞化学染色

生物大分子样品的保存

生物大分子制成品的正确保存极为重要,一旦保存不当,辛辛苦苦制成的样品失活、变性、变质,使前面的全部制备工作化为乌有,损失惨重,全功尽弃。影响生物大分子样品保存的主要因素有:⑴空气:空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化。空气中微生物的污染可使样品腐败变质,样品吸湿后会引起潮解变性,同时也为微生物

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

蛋白质特性与分离纯化技术的选择

摘要:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质提纯的方法。关键词:蛋白质 分离纯化前言    蛋白

蛋白质特性与分离纯化技术的选择

摘要:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质提纯的方法。关键词:蛋白质 分离纯化前言    蛋白

检测实验室的实验用水知识大全

  水的基本性质  •1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致,因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时,二者会由静电交互作用与氢键结合,互相吸引并保持一定的距离。而1个水分子可以同时与4个水分子结合,形成晶体般的整齐结构。  •水分子聚合体中,由于氢键

实验室用水知识总结

  今天和大家分享的产品知识是关于实验室用水的,希望如下内容对大家有所帮助。   1.水的基本性质   1个水分子(H2O)是由1个氧原子和2个氢原子弯曲键结而成。由于正、负电荷的中心不一致,因此属于极性分子。当2个水分子同时存在时,二者会由静电交互作用与氢键结合,互相吸引并保持一

多肽纯化十问十答

  1. 多肽含量与多肽纯度有什么区别?   一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的水份及有机盐分等杂质,多肽纯度仅指多肽本身所含肽产品的含量及杂质的含量,不包括水份等杂质;而多肽含量则是指目标多肽在产品中的净含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法来检测;因此一条多肽即使纯

关于多肽纯化的问题解答

  1. 多肽含量与多肽纯度有什么区别?   一条多肽产品中除了多肽本身还包括生产过程中带入的水份及有机盐分等杂质,多肽纯度仅指多肽本身所含肽产品的含量及杂质的含量,不包括水份等杂质;而多肽含量则是指目标多肽在产品中的净含量,一般以N元素分析或氨基酸分子的方法来检测;因此一条多肽即使纯

亲和层析实验:常规方法

实验步骤一、亲和介质的选择亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过程中维持良好的流动特征。优选介质应具备便宜、易获取和使用简便的特点。

核酸分离与纯化的设计与原则(二)

(四)核酸的浓缩、沉淀与洗涤随着核酸提取试剂的逐步加入,以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失,样品中核酸的浓度会逐渐下降,及至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时,需要对核酸进行浓缩。沉淀是核酸浓缩最常用的方法,其优点在于核酸沉淀后,可以很容易地改变溶解缓冲液和调整核酸溶液至所

亲和层析实验:常规方法

实验步骤 一、亲和介质的选择 亲和纯化的成功取决于是否选择了合适的固相载体和配基。理想的亲和介质 (如吸附配基的固相载体)应该具备孔隙大、理化性质高度稳定的特征。亲和介质可以选择性的捕获相应耙标,既保证较弱的非特异性吸附,又可以在整个过

酶标记抗体

酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否,因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体,它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(

重结晶的原理和经典问题案例

在有机合成实验和药物生产的过程中,我们最常用的纯化方式当属重结晶了,所以如何进行正确的重结晶操作很重要,但了解重结晶原理和与之相关案例同样不容忽视。重结晶(recrystallization)是将晶体溶于溶剂或熔融以后,又重新从溶液或熔体中结晶的过程。重结晶可以使不纯净的物质获得纯化,或使混合在一起

ELISA的试剂-2

3.1.3  包被用抗原   用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中

如何提高转染实验的效率

在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染  实验的效率有何影响,并且合理的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。 【组织培养试剂】 一般提示:优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各

ELISA中的试剂(2)-结合物

3.2  结合物 结合物即酶标记的抗体(或抗原),是ELISA中最关键的试剂。良好的结合物应该是既保有酶的催化活性,也保持了抗体(或抗原)的免疫活性。结合物中酶与抗体(或抗原)之间有恰当的分子比例,在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的(未结合的)酶或游离的抗体(或抗原)。此外,结合物尚要