基于胚胎干细胞的同源重组技术介绍
基因改造（包括敲除和敲进）小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。今天呢，就给大家介绍最传统最稳定的基因改造技术：基于胚胎干细胞的同源重组技术。Capecchi和Smithies早在在1989年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），即基因打靶（gene targeting），如果用外源抗性基因将基因上的一段重要序列替换掉，就成功将目的基因实现了基因敲除（gene knockout），利用这种ES的显微注射就可以制作出基因敲出小鼠（KO Mice: knockout mice）;由于这一工作，Capecchi和Smithies于2007年与Evans分享了诺贝尔医学奖。 图片来源[1] 是不是感觉很高级？那么，问题......阅读全文
基于胚胎干细胞的同源重组技术介绍
基因改造（包括敲除和敲进）小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。今天呢，就给大家介绍最传统最稳定的基因改造技术：基于胚胎干细胞的同源重组技术。Capecchi和Smithies早在在1989年根据同源重组（homo
同源重组法技术介绍
同源重组法：同源重组（homologous recombination）是将外源基因定位导入受体细胞的染色体上，在该座位因有同源序列，通过单一或双交换，新基因片段替换有缺陷的片段，达到修正缺陷基因的目的。如在新基因片段旁组装一Neo基因，则在同源重组后，因有Neo基因，可在含有新霉素（neomyci
同源重组技术原理
同源重组技术原理：基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为
关于同源重组的基本介绍
同源重组（ homologous recombination）是指发生在两段同源序列之间的DNA片段交换。两段同源序列既可以完全相同，也可以存在差异，既可以位于两个DNA分子上，也可以位于一个DNA分子中。真核生物的同源染色体交换及姐妹染色单体交换、细菌的转导和转化、噬菌体的重组都属于同源重组。
关于同源重组的Holliday模型介绍
Holliday于1964年提m Holliday模型，将同源重组分为四个阶段。 1．同源序列配对。 2．形成Holliday结构，即两段同源序列的单股同源DNA的同一磷酸二酯键被水解，同源末端交换，连接，形成Holliday结构（HoIJiday structure，又称Holliday连
关于同源重组的基本内容介绍
我们可以看到，同源重组一般都在染色体内仍按DNA序列的原来排列次序。但是在所谓位点特异性重组（site-specific recombination）中，DNA节段的相对位置发生了移动，从而得到不同的结果─DNA序列发生重排。位点特异性重组不依赖于DNA顺序的同源性（虽然亦可有很短的同源序列），
非同源重组的概念
非同源重组指的是发生在不含同源序列的DNA序列间的重组。这可能导致染色体易位，有时会导致癌症。
关于同源重组的双股断裂修复模型介绍
双股断裂修复模型（ double-strand break repaii。mnodel）也将同源重组分为四个阶段。 1、同源序列配对。 2、形成3’端突出结构，即配对同源序列之一的DNA双链水解，并由5’外切核酸酶水解，形成3'端突出结构（即3’黏端）（①~②） 3、形成Holli
同源重组的概念和过程
同源重组(Homologous Recombination) 是指发生在非姐妹染色单体(non-sister chromatid) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化,如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、Rec
同源重组的原理是什么？
同源重组（Homologous Recombination) 是指发生在非姐妹染色单体（sister chromatid) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等
DNA－同源重组的关键分子机制
蛋白质与植物基因研究国家重点实验室研究团队揭示 DNA 同源重组的关键分子机制 作为三大DNA代谢途径（DNA 复制、重组、损伤修复）之一，DNA同源重组（Homologous Recombination）是生命体的基本生物事件。它在细胞生长、减数分裂、配子形成、物种进化、DNA双链断裂修复、
重组－DNA－技术介绍
中文名称重组 DNA 技术英文名称recombinant DNA technique定 义在体外将两个或多个不同的DNA片段全部或部分构建成一个DNA分子的方法。应用学科细胞生物学（一级学科），细胞生物学技术（二级学科）
DNA损伤修复机制——非同源末端链接NHEJ和同源重组HR
生命极其脆弱，我们每天在电子辐射、紫外线、雾霾等等各种外部环境及细胞代谢产物等内源因素影响下，我们生命的核心-DNA都会受到不同程度的损伤，其中DNA双链断裂（DSBs，Double strand breaks）是损伤中最为严重的一种，然而生命却又极其强大，我们无时无刻不在受伤，也无时无刻不
DNA损伤修复机制——非同源末端链接NHEJ和同源重组HR
生命极其脆弱，我们每天在电子辐射、紫外线、雾霾等等各种外部环境及细胞代谢产物等内源因素影响下，我们生命的核心-DNA都会受到不同程度的损伤，其中DNA双链断裂（DSBs，Double strand breaks）是损伤中最为严重的一种，然而生命却又极其强大，我们无时无刻不在受伤，也无时无刻不在自
DNA损伤修复机制——非同源末端链接NHEJ和同源重组HR
【干货】拯救你受伤的DNA-NHEJ与HR生命极其脆弱，我们每天在电子辐射、紫外线、雾霾等等各种外部环境及细胞代谢产物等内源因素影响下，我们生命的核心-DNA都会受到不同程度的损伤，其中DNA双链断裂（DSBs，Double strand breaks）是损伤中最为严重的一种，然而生命却又极
RNA为模板－首次实现植物同源重组修复
中国农业科学院作物科学研究所作物转基因技术与应用创新团队与美国加州大学圣地亚哥分校合作,使用核糖核苷酸（RNA）作为同源重组修复（HDR）的模板，成功获得后代无转基因成分的抗ALS抑制剂类除草剂水稻植株。这是在植物中首次成功利用RNA作为脱氧核糖核酸（DNA）同源重组修复模板。相关研究论文北京时
研究揭示植物调控同源重组修复的新机制
近日，华中农业大学生命科学技术学院教授严顺平团队在国际学术期刊PNAS在线发表成果。该研究不仅揭示了植物调控同源重组修复的新机制，也为利用同源重组修复机制提高植物基因打靶效率提供了新思路。同时，该研究还首次揭示了植物调控SOG1蛋白稳定性的机制，具有重要的科学意义。所有生物都需要把正确的遗传信息（D
遗传发育所解析同源重组保障的新机制
减数分裂过程中，性母细胞会主动产生DNA双链断裂（double-strand break, DSB），起始同源重组。同源重组正常发生在同源DNA之间，若在非同源DNA之间发生重组，则会导致后代基因组的紊乱。为此，生物体进化出了一套完善的体系，避免在序列相似的非同源DNA之间发生重组。但是目前对该
基因敲除技术概述（一）
1．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成
遗传发育所在同源重组机制研究中取得进展
减数分裂是维持生物体染色体数恒定，导致遗传重组产生的基础。减数分裂缺陷是导致不孕、不育和出生障碍的主要原因。绝大多数减数分裂基因在不同物种中有着高度保守的功能。HEI10基因最初在人类体细胞中分离，并证明有调控细胞周期的功能。在小鼠中的研究表明，HEI10基因的突变会导致减数分裂异常并最终导致不
通过自杀质粒同源重组构建细菌突变株
自杀性质粒载体：一般用于基因突变。将突变的目的基因克隆到自杀性质粒载体上，通过接合等使其进入宿主，由于在宿主菌中不存在复制基因启始所需的复制蛋白（如Pi蛋白等），其无法复制，在外界选择性压力的作用下,自杀性质粒载体所携带的突变基因就与宿主染色体上的野生型发生基因发生二次同源重组，产生了带有突变的突变
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
基因敲除技术
一．概述：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较
专访张博：两篇Nature子刊技术论文开创同源重组新方法
2011年在我们还不是十分熟悉它的名字的时候，它被评为了当年Nature Methods杂志的年度技术，2012年在这种技术已成功应用于人类体外培养细胞、酵母、线虫、斑马鱼、植物、大小鼠等多个领域之后，它又入选了Science十大科学突破。这就是TALEN (Transcription
《自然》：基因重组可制造“类胚胎干细胞”
科学家有望摆脱对卵子和晶胚的依赖，干细胞个体治疗获得希望 由于胚胎干细胞可以发展成任何种类的身体组织，因此一直受到科学家的高度重视。最近，三个独立的科研小组的研究成果表明，对正常小鼠细胞进行基因重组改造，能够成功制造出“胚胎干细胞”，几乎与源于晶胚的胚胎干细胞没有区别。这一技术有望使科学家摆脱了对
基因敲除的实验步骤
构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染色体靶位
基因敲除技术的研究历史
基因敲除技术是20世纪80年代发展起来的，是建立在基因同源重组技术基础以及胚胎干细胞技术基础上的一种新分子生物学技术。所谓胚胎干细胞（EmbryonicStem cell，ES）是从着床前胚胎（孕3—5天）分离出的内细胞团（Inner cellmass，ICM）细胞，它具有向各种组织细胞分化的多分化
基因靶向的基因敲除
实验步骤构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染
基因敲除的实验步骤
实验步骤构建重组基因载体绝大多数的基因敲除策略都是基于同源重组的机制，其基因载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等非同源序列，其中同源序列是影响同源重组效率的关键因素。用电穿孔显微注射方法把重组DNA转入受体细胞（一般是胚胎干细胞）核内。同源重组基因重组时以载体的同源序列取代染
重组PCR技术的定义和原理介绍
1.定义：使两个不相邻的DNA片段重组在一起的PCR称为重组PCR(recombinant PCR)。Mullis等于1986年报道了由PCR扩增的两个DNA片段通过重组合后再经延伸而制备出新的DNA分子。2. 其基本原理：将突变碱基，插入或缺失片段，或一种物质的几个基因片段均设计在引物中，先分段对