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双向电泳(twodimensionalelectrophoresis,2DE)2

2.[操作步骤] 1. 将研磨管离心一分钟(不低于12000×g)弃上清。 2. 加入裂解液(200-300ul)充分vortex. 3. 再加入样品鼠脑组织(低于100mg)充分研磨。然后可以再加入裂解液至1ml.. 4. 将组织悬液离心5-10min(高于12000g)去除树脂和细胞碎片。 5. 收集上清。 3.[试剂准备] 1.研磨管 2.裂解液:称取尿素4.8g、CHAPS0.4g、PMSF100mg,用纯水溶解至10ml,分装成500μl 于-20℃储存,使用时,每500μl液体加DTT5mg,IPGbuffer10μl。 三、蛋白质定量 1.[基本原理]定量作为生物实验室的日常工作之一,具有非常重要的意义。在蛋白质组学研究中,我们常常需要对蛋白质进行快速定量。无论是对蛋白质表达谱的定量比较还是蛋白质理化性质的分析,都建立在准确的定量这一基础之上。蛋白质的......阅读全文

双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)-1

一、蛋白质组学概论随着人类基因组计划的实施,生命科学步入了后基因组时代,出现了不同于以往经典生物实验科学的全新的研究方式─“生物大科学”。这种生物大科学的核心思想是整体性研究,即以生物体内某类物质为对象进行完整的研究。过去对生命活动的研究仅限于研究细胞内个别的基因或蛋白质,而基因组学和蛋白质组学的目

蛋白质组技术的研究进展

  大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信

蛋白质组技术的研究进展

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定. 1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成. 然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时代,许多DNA序列信息仅

蛋白质组技术的研究进展(一)

大规模基因组测序计划的实施已改变生命科学的重心,在相当短的时期内,一些原核生物和某些低等真核生物的基因组序列已被测定.  1995年,流感嗜血杆菌基因组序列首次被破译,在此后不到两年的时间,近50个细菌的基因组序列已被完成.  然而,这仅仅是理解有机物功能的一个起点. 在基因组时

蛋白质组学概念的起源和发展

  蛋白质组学的诞生和发展,离不开多学科和技术的逐渐交叉融合。这些学科技术包括(但不限于)基因组学、生物化学、分析化学、自动化、基于电磁场的精密质谱仪、信号处理、数理统计和计算机科学。近年来,分子医学、大数据技术和人工智能的发展,进一步加速推动了蛋白质组学的成长,使之在精准医疗领域展示出越来越大的应

常用电泳法

1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。2、纸电

常用电泳法

 1、醋酸纤维素薄膜电泳(电泳法测定)醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检

宿主残留蛋白HCP ELISA抗体覆盖率检测的应用

现今许多生物药物(抗体、疫苗、重组蛋白等)的制备还是通过生物体系合成,诸如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,大肠杆菌等,这些细胞称为宿主细胞。尽管已经采用多种纯化方式,但是在生物药物中还是可能会有微量的宿主蛋白残留(HCP)。由于HCP残留可能对生物药物的安全性和药效性能产

宿主残留蛋白HCP ELISA抗体覆盖率检测的应用

  现今许多生物药物(抗体、疫苗、重组蛋白等)的制备还是通过生物体系合成,诸如非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,大肠杆菌等,这些细胞称为宿主细胞。尽管已经采用多种纯化方式,但是在生物药物中还是可能会有微量的宿主蛋白残留(HCP)。由于HCP残留可能对生物药物的安全性和药效性

Sapphire双模式多光谱激光成像系统在抗体药研发中的应用

  全球范围内,生物药,尤其是抗体类药物,经过多年的基础研究和技术积累,已经开始迸发其生命力,成为药物领域中最有活力和前景的一个分支。在全球范围已经获批上市的抗体类抗体药至少有80多个,在新冠肺炎抗体药研发中, 现在现已确立了7个抗冠状病毒靶点,同时也是药物筛选靶点。包括:(1) 病毒配体Spike

蛋白质组最新研究进展

  蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。 在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋

顽拗性植物组织的蛋白质组学研究(苯酚法提取蛋白质)

1. 前言提取蛋白质是蛋白质组学研究的第一步。植物组织的蛋白质含量较低,并且存在多种非蛋白质成分,如细胞壁及贮藏多糖、脂质和酚类化合物,使蛋白质的提取难度增大 。植物蛋白质的可溶性与它们的细胞内定位关系密切,传统的蛋白质提取方法是用水合缓冲液、去垢剂或直接沉淀法 [1] 。除了普遍使用的 TCA