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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直...1

目的:1.学习SDS—PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。2.掌握垂直板型电泳的基本操作技术。二、原理:蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。1967年,Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS),则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。在一定条件下,蛋白质的分子量与电泳迁移率间的关系,可用下式表示:因此,测定某个蛋白质的分子量,只需比较它和一系列已知分子量的蛋白质在SDS-凝胶电泳时的迁移率就可以了。后来,Weber等人基本按Shapiro的方法对约40种蛋白质进行了研究,进一步证实了这个方法地可行性(见图16-1)。用这种方法测定蛋白质的分子量,简便、快速,只需要廉价的设备和微克量的蛋白质样品;所得结果,在分子量为15,000—200,000的范......阅读全文

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直...-1

目的:1.学习SDS—PAGE测定蛋白质分子量的基本原理。2.掌握垂直板型电泳的基本操作技术。二、原理:蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。1967年,Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直...-2

三、器材与试剂: 1.器材: ①夹心式垂直板电泳槽,凝胶模(135×100×1.5mm)(北京六一仪器厂) ②直流稳压电源(电压300—600V,电流50—100mA) ③吸量管(1,5,10 ml) ④烧杯(25,50,100 ml) ⑤ 细长头的滴管 ⑥1ml注射器及6号长针头 ⑦微量注射器(1

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直...-3

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直板型电泳)-3⑤1%TEMED:取TEMED1ml,加重蒸水至100ml,置棕色瓶内4℃贮存。⑥10%过硫酸铵(AP):称AP1g,加重蒸水至 100ml,此液应每周新配,置棕色瓶内,4℃贮存。⑦电极缓冲液(0.1%SDS,0.1mol·L-1 p

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量(垂直...-4

2、将长、短玻璃板分别插到 形硅橡框的凹形槽中。注意勿用手接触灌胶面的玻璃。3、将已插好玻璃板的凝胶模平放在上贮槽上,短玻璃板应面对上贮槽。4、将下贮槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上贮槽,双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。5、竖直电泳槽,在长玻璃板下端与硅胶模框交界的缝隙内加入已融化的1%琼脂(糖)。其目

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量

一、原理用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质(protein),主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应,使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(Sodiumdod

常用的一些测定蛋白质分子量的几种方法介绍

1.凝胶过滤法  凝胶过滤法分离蛋白质的原理是根据蛋白质分子量的大小。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准,进行凝胶层析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知

测定蛋白质分子量的常用方法

知道蛋白质分子量、氨基酸组成计算器http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/一般的方法:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量[原理]十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量,

蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳-1

【实验原理】蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒,在电场中能向正极或负极移动。当溶液pH值大于蛋白质等电点时,蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动;反之则向负极移动,这种带电的颗粒在电场中泳动的现象称为电泳(electrophoresis)。不同的蛋白质由于等电点不同,在电场中的泳动速率也不

蛋白质分子量的测定(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)

一、原理用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质(protein),主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应,使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(Sodiumdod

蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

目的要求学会SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法原理。掌握用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的操作技术。实验原理:SDS是十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)的简称,它是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键、疏水键打开,并结合到蛋白质分子上(在一定