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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量

一、原理用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质(protein),主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应,使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate简称SDS)。这种阴离子表面活性剂浓度大于1mmol/L时,以1.4gSDS与1g蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷,这种负电荷远远超过了蛋白质分子原有的电荷差别,从而降低或消除了各种蛋白质天然电荷差别。巯基乙醇是蛋白质分子中二硫键的还原剂,使多肽组分分成单个亚单位。SDS可打断蛋白质的氢键。因此它与蛋白质结合后,还引起蛋白质构象的改变,此复合物的流体力学和光学性质均表明,它们在水溶液中的形状近似长椭园的棒状。不同蛋白质-SDS复合物的短轴相同,约1.8nm,而长轴改变与蛋白质的分子量成正比。所以,各种SD......阅读全文

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生实验

电泳实验的危害与防护注意事项

1.DNA电泳与溴化乙锭“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所以在学生

Western blot 标准操作规程(SOP)

关键词:western blot 聚丙烯酰胺 分离胶 积层胶 电泳目的:蛋白质的检测与分析【原理】一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除ELISA法外,也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意,故

蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立,1969年由weber和Osborn进一步完善。主要用于(1)蛋白质的分离(2)蛋白质的纯化。实验方法原理蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫键还原,氢键等打开,形成按1.4 g SDS/1 g蛋白质比例的

电泳技术

电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。    电泳技术的

SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量

实验目的了解SDS-PAGE垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。学习并掌握SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。实验原理    SDS-PAGE电泳法,即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法,。1.在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以

蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

SDS-PSGE             实验方法原理 蛋白质在十二烷基硫酸钠(SDS)和巯基乙醇的作用下,分子中的二硫

电泳实验的危害与防护注意事项

  1.DNA电泳与溴化乙锭   “DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验的基础型实验。“质粒DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及到DNA的提纯及鉴定的实验都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭对DNA进行染色。EB是强诱变剂,具有高致癌性,会在60~70 cc蒸发,所

电泳的原理、分类和应用

  【概述】带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。  1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早发现。 

电泳分析常用方法

(一)醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄 膜。这种薄膜对蛋白质样品吸附性小,几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象,又因为膜的亲水性比较小,它所容纳的缓冲液也少,电泳时电流的大部分由样 品传导,所以分离速度快,电泳时间短,样品

SDS-PAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定

一、实验目的与原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现,如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,

蛋白质的Western blot印迹分析

一、原理  一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白,因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。    原理:Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离;并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持

双向电泳实验

ISO-DALT 方法 IPG-DALT 方法             实验方法原理 双向电泳(two-dime

蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

目的要求学会SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法原理。掌握用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质分子量的操作技术。实验原理:SDS是十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate)的简称,它是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键、疏水键打开,并结合到蛋白质分子上(在一定

双向电泳实验——ISO-DALT 方法

实验方法原理双向电泳(two-dimensional electrophoresis)是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合,即先进行等电聚焦电泳(按照pI分离),然后再进行SDS-PAGE(按照分子大小),经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒尿素去污剂仪器、耗材

双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)-1

一、蛋白质组学概论随着人类基因组计划的实施,生命科学步入了后基因组时代,出现了不同于以往经典生物实验科学的全新的研究方式─“生物大科学”。这种生物大科学的核心思想是整体性研究,即以生物体内某类物质为对象进行完整的研究。过去对生命活动的研究仅限于研究细胞内个别的基因或蛋白质,而基因组学和蛋白质组学的目

蛋白质组学实验技术大全

每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新,蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多,但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前,先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mR

蛋白质组与蛋白质组学简介-2

3 甲基化干扰实验用来检测蛋白质的结合位点。甲基化修饰的DNA探针可以干扰蛋白质的结合。结合位点上未被修饰的DNA片段才能与蛋白结合,然后将DNA从被修饰的碱基处切割,电泳分离,结合蛋白的DNA在结合位点上不能被修饰,不能切断,可确定结合位点的位置。 4 Dnase I 足纹分析 蛋白

分子生物学试验方法探讨二 琼脂糖凝胶电泳技术

  分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术   分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术、琼脂糖凝胶的特点    天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼

分子生物学试验方法探讨:琼脂糖凝胶电泳技术

分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术分子生物学试验方法探讨二-琼脂糖凝胶电泳技术、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧

琼脂糖凝胶电泳技术

  一、琼脂糖凝胶的特点    天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,

琼脂糖凝胶电泳技术概述

一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

蛋白质分子量的测定(SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法)

一、原理用聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离鉴定蛋白质(protein),主要依赖于电荷效应和分子筛效应。再与标准样品对照即可确定各区带的成分。要利用凝胶电泳测定某样品的蛋白质分子量就必须去掉其电荷效应,使样品的蛋白质分子的迁移率完全取决于分子量。如在电泳体系中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(Sodiumdod

聚丙烯酰胺凝胶电泳(圆盘电泳)

实验概要本实验介绍了聚丙烯酰胺凝胶电泳(圆盘电泳)的操作流程。实验原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用丙烯酰胺(acrylamide,Acr)与N,N亚甲基双丙烯酰胺(N,Nmethylene bisacrylamide,Bis)在催化剂的作用下,聚合成大分子凝胶后,加样,再进行电泳的一种方法。聚丙

Western Blot 相关技术操作与原理-1

【实验原理】: Western Blot 印迹方法,又称为免疫印记,是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离,并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物(NC膜或PVDF膜)上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜上的靶蛋白进

电泳法(三个主要的方法,步骤)

电泳法电泳法是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其含量(%)的方法。各电泳法,除另有规定外,照下述方法操作。第

什么是电泳法?

  【电泳法】是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其含量(%)的方法。    【分类】&n

分子生物学常用实验技术(page 3)

分子杂交技术    互补的核苷酸序列通过Walson-Crick 碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA 分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DN

蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

蛋白质凝胶电泳通常用于(1)分析分子生物学、遗传学和生物化学(2)制备技术(3)采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部分提纯分子。实验方法原理将蛋白质样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠(SDS)以及硫基乙醇一起加热,使蛋白质变性,多肽链内部